Les estructures especials del microscopi de fluorescència inclouen:
(I) Sistema de filtre
El bloc de filtre és una part important d'un microscopi de fluorescència. Els seus components bàsics consisteixen en un filtre d'excitació (primer filtre de barrera), un filtre d'emissió (segon filtre de barrera) i un mirall de divisió de feix. Les designacions dels models i els noms dels filtres varien segons els fabricants.
Filtres d'excitació i filtres d'emissió En funció de les característiques de la font de llum i els fluorocroms, es seleccionen habitualment les tres combinacions coincidents següents. Proporcionen llum d'excitació dins d'un rang de longitud d'ona específic i transmeten la fluorescència emesa per la mostra a l'ocular per a la imatge.
Excitació ultraviolada: el filtre d'excitació transmet llum ultraviolada i bloqueja la llum visible per sobre de 400 nm. El filtre d'emissió corresponent permet que passi la llum blava, produint una imatge blava al camp de visió, per exemple, per a la tinció DAPI.
Excitació de llum blava: el filtre d'excitació transmet llum blava i bloqueja la llum d'altres longituds d'ona. El filtre d'emissió corresponent permet que passi la llum verda, per exemple, per a l'etiquetatge GFP.
Excitació de llum verda: el filtre d'excitació transmet llum verda i bloqueja la llum d'altres longituds d'ona. El filtre d'emissió corresponent normalment permet que passi la llum vermella, per exemple, per a la tinció de rodamina.
Mirall que divideix el feix Bloqueja i reflecteix completament la llum d'excitació, alhora que transmet llum d'emissió del rang de longitud d'ona corresponent. El seu model es combina amb el filtre d'excitació i el filtre d'emissió.
(II) Objectius i oculars
Es poden utilitzar la majoria d'objectius, però es prefereixen els objectius apocromàtics i acromàtics. Tenen una autofluorescència extremadament baixa i una transmitància adequada (rang de longitud d'ona) per a aplicacions de fluorescència. La brillantor de fluorescència d'una imatge en el camp de visió del microscopi és proporcional al quadrat de l'obertura numèrica de l'objectiu i inversament proporcional a la seva ampliació. Per millorar la brillantor de les imatges de fluorescència, s'han d'utilitzar objectius amb una gran obertura numèrica. Especialment per a mostres poc fluorescents, seleccioneu objectius amb una gran obertura numèrica i una alta transmissió de la llum, combinats amb els oculars d'augment més baix possible.
(III) Altres Components Òptics
Mirall reflectant: la seva capa reflectant sol estar recoberta d'alumini. L'alumini té una baixa absorció de la llum ultraviolada i la banda blava-violada de la llum visible, amb una reflectància superior al 90% (la plata només arriba al voltant del 70%). Generalment s'adopten miralls plans. Condensador: els condensadors dissenyats especialment per a microscopis de fluorescència estan fets de vidre de quars o un altre vidre transparent als UV. Unitat d'epi-il·luminació: a més de la funció d'una font de llum transmesa, és més adequada per a l'observació directa d'exemplars opacs i semitransparents, com ara rodanxes gruixudes, membranes de filtre, colònies bacterianes i cultius de teixits. Molts microscopis de fluorescència de recent desenvolupament adopten sistemes d'epi-il·luminació, coneguts com a microscopis d'epifluorescència.
