Preparació i observació de mostres biològiques amb microscopis electrònics
La resolució d'un microscopi depèn de la longitud d'ona de la llum utilitzada. El microscopi electrònic, que va sorgir el 1933, utilitza com a font de llum feixos d'electrons amb una longitud d'ona molt més curta que la llum visible. Això millora molt la seva resolució en comparació amb els microscopis òptics. Les diferències en les fonts de llum també donen lloc a una sèrie de distincions entre microscopis electrònics i microscopis òptics.
Basant-se en les diferències en els principis d'imatge del feix d'electrons i les maneres en què el feix interacciona amb les mostres, els microscopis electrònics moderns han evolucionat en molts tipus. Els més utilitzats són els microscopis electrònics de transmissió (TEM) i els microscopis electrònics d'escaneig (SEM). L'ampliació total de TEM pot oscil·lar entre 1.000 i 1.000.000 de vegades, mentre que la de SEM oscil·la entre 20 i 300.000 vegades. Aquest experiment introdueix principalment la preparació de mostres per a microscopis electrònics de transmissió i microscopis electrònics d'escaneig.
II. Aparells i Materials
Soca:Escherichia colicultura inclinada
Solucions i reactius: Formvar, àcid sulfúric concentrat, etanol absolut, aigua estèril, solució aquosa al 2% de fosfotungstat de sodi (pH 6,5–8,0), solució de polivinil formal al 0,3% (dissolt en cloroform), citocrom C, acetat d'amoni, plasmidi pBR322.
Instruments i subministraments: microscopi òptic convencional, reixetes de coure, embut Buchner, vas de precipitats, placa de Petri, comptagotes estèrils, pinces estèrils, agulla de dissecció, portaobjectes de vidre, hemocitòmetre, evaporador al buit, assecador de punt crític, etc.
III. Procediments operatius
(1) Preparació i observació de mostres per a microscòpia electrònica de transmissió
Tractament de reixes metàl·liques Les mostres per a la microscòpia òptica s'observen sobre portaobjectes de vidre. No obstant això, per a la microscòpia electrònica de transmissió, els electrons no poden penetrar en el vidre, de manera que s'utilitzen substrats de malla, comunament coneguts com a reixetes d'exemplars. Les reixetes de mostres estan disponibles en diverses especificacions segons el material i la forma. Les reixetes de coure de 200-400 malles són les més utilitzades. Les reixetes de coure s'han de netejar abans d'utilitzar-les per eliminar els contaminants, en cas contrari la qualitat de les pel·lícules de suport i la claredat de les micrografies de les mostres es veuran afectades. Aquest experiment adopta reixetes de coure de 400 malles, tractades de la següent manera: primer remull en solució Formvar durant diverses hores, esbandida repetidament amb aigua destil·lada i després deshidratar-se amb etanol absolut. Si les reixetes romanen brutes després dels passos anteriors, remulleu-les en àcid sulfúric concentrat diluït (1:1) durant 1-2 minuts, o bulliu-les en una solució de NaOH a l'1% durant uns quants minuts. Esbandiu bé amb aigua destil·lada, deshidrateu-lo en etanol absolut i reserveu-lo per a un ús posterior.
