Què és la microscòpia de fluorescència de dos fotons
El principi bàsic de l'excitació de dos fotons és: en el cas d'alta densitat de fotons, les molècules fluorescents poden absorbir dos fotons de longitud d'ona llarga al mateix temps i emetre un fotó de longitud d'ona més curta després d'un període curt de l'anomenat estat de vida excitat. . ; l'efecte és el mateix que utilitzar un fotó la longitud d'ona del qual és la meitat de la longitud d'ona llarga per excitar una molècula fluorescent. L'excitació de dos fotons requereix una alta densitat de fotons. Per no danyar les cèl·lules, la microscòpia de dos fotons utilitza làsers polsats amb mode d'alta energia. El làser emès per aquest làser té una energia màxima alta i una energia mitjana baixa, l'amplada del pols és de només 100 femtosegons i la seva freqüència pot arribar als 80 a 100 megahertz. Quan s'utilitza una lent d'objectiu d'obertura numèrica alta per enfocar els fotons del làser polsat, la densitat de fotons al punt focal de la lent objectiu és la més alta i l'excitació de dos fotons només es produeix al punt focal de la lent objectiu, de manera que el microscopi de dos fotons no necessita un forat confocal, cosa que millora l'eficiència de detecció de fluorescència.
En els fenòmens de fluorescència generals, a causa de la baixa densitat de fotons de la llum d'excitació, una molècula fluorescent només pot absorbir un fotó alhora, i després emetre un fotó fluorescent mitjançant una transició radiativa, que és la fluorescència d'un sol fotó. Per al procés d'excitació de fluorescència utilitzant làser com a font de llum, es pot produir una fluorescència de dos fotons o fins i tot de múltiples fotons. En aquest moment, la intensitat de la font de llum d'excitació utilitzada és alta i la densitat de fotons compleix els requisits de les molècules fluorescents que absorbeixen dos fotons al mateix temps. En el procés d'utilitzar un làser general com a font de llum d'excitació, la densitat de fotons encara no és suficient per produir el fenomen d'absorció de dos fotons. Normalment, s'utilitza un làser polsat de femtosegon, i la seva potència instantània pot arribar a l'ordre de megawatts. Per tant, la longitud d'ona de la fluorescència de dos fotons és més curta que la longitud d'ona de la llum d'excitació, que és equivalent a l'efecte produït per l'excitació a la meitat de la longitud d'ona d'excitació.
