Quina diferència hi ha entre la microscòpia confocal de fluorescència i làser?
microscopi de fluorescència
1. El microscopi de fluorescència és un dispositiu que utilitza la llum ultraviolada com a font de llum per il·luminar l'objecte que s'està provant, fent que emeti fluorescència, i després observar la forma i la posició de l'objecte sota el microscopi. La microscòpia de fluorescència s'utilitza per estudiar l'absorció, el transport, la distribució i la localització de substàncies dins de les cèl·lules. Algunes substàncies de les cèl·lules, com la clorofil·la, poden emetre fluorescència després d'estar exposades a la radiació ultraviolada; Algunes substàncies en si mateixes poden no emetre fluorescència, però si es tenyeixen amb colorants fluorescents o anticossos fluorescents, també poden emetre fluorescència sota radiació ultraviolada. La microscòpia de fluorescència és una de les eines per a la investigació qualitativa i quantitativa d'aquestes substàncies.
2. Principi del microscopi de fluorescència:
(A) Font de llum: la font de llum emet llum de diferents longituds d'ona (des de l'ultraviolat fins a l'infraroig).
(B) Font de llum del filtre d'excitació: transmet llum d'una longitud d'ona específica que pot produir fluorescència a l'exemplar, mentre bloqueja la llum que no serveix per a la fluorescència d'excitació.
(C) Espècimens fluorescents: generalment tenyits amb pigments fluorescents.
(D) Filtre de bloqueig: transmet selectivament la fluorescència bloquejant la llum d'excitació que no ha estat absorbida per la mostra, i algunes longituds d'ona també es transmeten selectivament en fluorescència. Un microscopi que utilitza llum ultraviolada com a font de llum per emetre fluorescència de l'objecte irradiat. El microscopi electrònic va ser muntat per primera vegada per Knorr i Harroska a Berlín, Alemanya, l'any 1931. Aquest tipus de microscopi utilitza un feix d'electrons d'alta velocitat en lloc d'un feix de llum. A causa de la longitud d'ona molt més curta del flux d'electrons en comparació amb les ones de llum, l'ampliació del microscopi electrònic pot arribar a 800000 vegades, amb un límit de resolució mínim de 0,2 nanòmetres. El microscopi electrònic d'escaneig, que es va començar a utilitzar l'any 1963, permet a la gent veure les petites estructures a la superfície dels objectes.
3. Àmbit d'aplicació: S'utilitza per ampliar imatges d'objectes petits. S'utilitza generalment per a l'observació de biologia, medicina, partícules microscòpiques, etc.
microscopi confocal
1. Un microscopi confocal afegeix una lent semireflexiva al recorregut de la llum reflectida, que doblega la llum reflectida que ja ha passat per la lent en altres direccions. Hi ha un deflector amb un forat al seu punt focal i el petit forat es troba al punt focal. Darrere del deflector hi ha un tub fotomultiplicador. Es pot imaginar que la llum reflectida abans i després del punt focal de la llum de detecció no es pot enfocar al petit forat a través d'aquest sistema confocal i serà bloquejada pel deflector. Així, el fotòmetre mesura la intensitat de la llum reflectida al punt focal.
2. Principi: els microscopis òptics tradicionals utilitzen fonts de llum de camp, i la imatge de cada punt de l'exemplar es veurà afectada per la difracció o la llum dispersa dels punts veïns; El microscopi confocal d'escaneig làser utilitza un raig làser per formar una font de llum puntual a través d'un forat il·luminat per escanejar tots els punts del pla focal de la mostra. El punt il·luminat de la mostra s'imatge al forat de detecció i es rep punt per punt o línia per un tub fotomultiplicador (PMT) o un dispositiu d'acoblament termoelèctric (cCCD) després del forat de detecció, formant ràpidament una imatge fluorescent al monitor de l'ordinador. pantalla. El forat d'il·luminació i el forat de detecció es conjuguen en relació amb el pla focal de la lent de l'objectiu. Els punts del pla focal es centren simultàniament en el forat d'il·luminació i el forat d'emissió, i els punts fora del pla focal no s'imaginaran al forat de detecció. Això dóna lloc a una imatge confocal que representa la secció transversal òptica de l'exemplar, superant l'inconvenient de les imatges borroses en la microscòpia convencional.
3. Camps d'aplicació: que inclouen medicina, investigació animal i vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia cel·lular, teixits i embrions, ciència dels aliments, genètica, farmacologia, fisiologia, òptica, patologia, botànica, neurociència, biologia marina, ciència dels materials, ciència electrònica, mecànica, geologia del petroli i mineralogia.
