Microscopi de biofluorescència vertical
El principi de la microscòpia de fluorescència és utilitzar una font de llum puntual altament eficient (com ara una làmpada de mercuri a pressió ultra-alta) per emetre una certa longitud d’ona de llum (com la llum ultraviolada 3650 λ o la llum blava blava de 4200 λ) a través d’un sistema de filtres de colors com a llum d’excitació, que excita les substàncies fluorescents en l’espectacle per emitar diversos colors de la fluorescència. A continuació, es filtra mitjançant un filtre de bloqueig (o suprimint) darrere de la lent objectiva i s’observa a través de l’efecte magnífic de l’ocular.
El filtre de bloqueig té dues funcions: en primer lloc, absorbeix i bloqueja la llum d’excitació d’entrar a l’ocular per evitar interferir amb la fluorescència i danyar els ulls; El segon és seleccionar i permetre que la fluorescència específica passi, mostrant un color fluorescent específic.
Els microscopis de fluorescència es poden dividir en dos tipus en funció del principi de la ruta de la llum:
1. Microscopi de fluorescència de transmissió
Els microscopis de fluorescència més antics utilitzen un focus per excitar la fluorescència passant la font de llum d’excitació a través del material de la mostra. El seu avantatge és una forta fluorescència a baixa ampliació, però el seu desavantatge és que la seva fluorescència disminueix amb la ampliació creixent. Per tant, només és adequat per observar materials exemplars més grans.
2. Microscopi de fluorescència de la llum caient
La llum d’excitació baixa de la lent objectiva a la superfície de la mostra, utilitzant la mateixa lent objectiva que el condensador d’il·luminació i la lent objectiva per recollir fluorescència.
Cal afegir un divisor de feixos de doble color (mirall dicroic) a la ruta òptica, que forma un angle de 45 graus amb l’eix òptic. La llum d’excitació es reflecteix en la lent objectiva i es centra en la mostra. La fluorescència generada per la mostra, així com la llum d’excitació reflectida des de la superfície de la lent objectiva i el vidre de coberta, introduïu la lent objectiva alhora i torneu al divisor de feixos de doble color per separar la llum d’excitació i la fluorescència. La llum d’excitació residual es bloqueja per l’absorció del filtre. Si s’utilitzen diferents combinacions de filtres d’excitació, separadors de feixos de doble color i filtres de bloqueig, poden satisfer les necessitats de diferents productes de reacció fluorescent.
Els avantatges d’aquest microscopi de fluorescència són la il·luminació de camp uniforme, la imatge clara i la fluorescència més forta amb una ampliació més gran.
