Estructura i components principals d'un microscopi de fluorescència
(1) Font de llum
Avui en dia, s'utilitza habitualment com a font de llum una làmpada de mercuri d'ultra alta pressió de 200 W. Està fet de vidre de quars, amb una forma esfèrica al mig i una certa quantitat de mercuri plena a l'interior. Durant el funcionament, la descàrrega entre els dos elèctrodes fa que el mercuri s'evapori i la pressió dins de l'esfera augmenta ràpidament. Quan el mercuri s'evapora completament, pot assolir 50-70 pressions atmosfèriques estàndard, que generalment triguen uns 5-15 minuts. La luminescència de les làmpades de mercuri d'ultra alta pressió és el resultat de la descàrrega entre elèctrodes, que contínuament es dissocia i redueix les molècules de mercuri i emet fotons. Emet una forta llum ultraviolada i blava violeta, que és suficient per excitar diverses substàncies fluorescents, per tant, s'utilitza àmpliament en microscopis de fluorescència.
Les làmpades de mercuri d'ultra alta pressió també emeten una gran quantitat d'energia tèrmica. Per tant, la sala de llum ha de tenir bones condicions de dissipació de calor i la temperatura de l'entorn de treball no ha de ser massa alta.
La nova làmpada de mercuri d'ultra alta pressió no requereix alta tensió per encendre's en la fase inicial d'ús. Després d'un temps d'ús, s'ha d'engegar amb una tensió alta (uns 15000 V). Després de començar, la tensió de treball es manté generalment a 50-60V i el corrent de treball és d'uns 4A. La vida útil mitjana d'una làmpada de mercuri d'ultra alta pressió de 200 W és d'unes 200 hores quan s'utilitza durant 2 hores cada vegada. Com més curt sigui el temps de funcionament, més curta serà la vida útil. Si s'utilitza només 20 minuts una vegada, la vida útil es redueix en un 50%. Per tant, intenteu minimitzar el nombre d'inicis quan feu servir. L'eficiència lumínica d'una bombeta disminueix gradualment durant l'ús. Un cop s'apaga la llum, s'ha d'esperar que es refredi abans de reiniciar. Després d'encendre la bombeta, no s'ha d'apagar immediatament per evitar l'evaporació incompleta del mercuri i danys a l'elèctrode. En general, cal esperar 15 minuts. A causa de l'alta pressió i la forta radiació ultraviolada de la làmpada de mercuri d'ultra alta pressió, la bombeta s'ha de col·locar a la cambra de la llum abans d'encendre-la per evitar lesions oculars i explosions durant el funcionament.
El circuit d'una font de llum de llum de mercuri d'ultra alta pressió (100 W o 200 W) i els seus components, inclosa la transformació de tensió, la supressió de corrent i la posada en marxa. Hi ha un sistema d'ajust del centre de llum de la bombeta a la sala de llums, amb un reflector còncava d'alumini instal·lat darrere de la bombeta i una lent captadora de llum instal·lada a la part davantera.
La làmpada de mercuri d'ultra alta pressió produïda al país GCQ-200 té un bon rendiment i pot substituir les bombetes importades com ara HBO-200, amb una vida útil mitjana de més de 200 hores i un preu relativament baix.
Un dispositiu de font de llum fluorescent de brom de tungstè d'alta temperatura de color senzill i portàtil desenvolupat a la Xina, amb volum petit, pes lleuger, baixa potència, ús dual d'AC i DC (amb font d'alimentació de CC integrada), fàcil de transportar, còmode d'utilitzar , ha estat promogut i aplicat.
(2) Sistema de filtrat de color
El sistema de filtre de color és una part important d'un microscopi de fluorescència, que consta d'una placa de filtre d'excitació i una placa de filtre de compressió. El model de la placa de filtre sovint és inconsistent entre els fabricants. Les plaques de filtre generalment reben el nom del to de color bàsic, amb la primera lletra que representa el to de color, la segona lletra que representa el vidre i el número que representa les característiques del model. Microscopi Olympus
(3) Lent objectiu
Es poden aplicar diverses lents d'objectius, però l'ús de lents d'objectius acromàtics és adequat per a la fluorescència a causa del seu rendiment extremadament baix d'autofluorescència i transmitància (rang de longitud d'ona). A causa del fet que la brillantor de fluorescència de la imatge al camp de visió del microscopi és directament proporcional al quadrat de la relació d'obertura de la lent objectiu i inversament proporcional a la seva ampliació, per tal de millorar la brillantor de la imatge de fluorescència, una lent objectiu s'ha d'utilitzar amb una relació d'obertura més gran. Sobretot a grans augments, el seu impacte és molt important. Per tant, per a mostres amb una fluorescència insuficient, s'ha d'utilitzar una lent objectiu amb una velocitat d'obertura elevada, combinada amb un ocular el més baix possible (4 x, 5 x, 6,3 x, etc.).
(4) Mirall reflectant
La capa reflectora d'un reflector és generalment revestida d'alumini perquè l'alumini absorbeix menys llum ultraviolada i visible a la regió blava porpra, amb un reflex de més del 90%, mentre que la plata només reflecteix el 70%; En general, s'utilitzen reflectors plans.
(5) Mirall de focus
El concentrador dissenyat i fabricat específicament per a la microscòpia de fluorescència està fet de vidre de quars o un altre vidre que transmet llum ultraviolada. Hi ha dos tipus d'observadors de camp fosc amb un camp de visió diferent. També hi ha un concentrador de fluorescència diferencial.
(6) Dispositiu de llum caiguda
El nou tipus de dispositiu de llum caiguda reflecteix les parts de longitud d'ona més curta (ultraviolada i blau morat) des de la font de llum fins al filtre de l'espectrofotòmetre d'interferència a causa de les propietats del recobriment del filtre. Quan el filtre s'enfronta a la font de llum en un angle de 45 graus. Quan s'inclina, es dirigeix verticalment cap a la lent de l'objectiu i es dirigeix cap a la mostra a través de la lent de l'objectiu, provocant que l'exemplar s'exciti. En aquest punt, la lent de l'objectiu actua directament com a condensador. Al mateix temps, les parts llargues del filtre (verd, groc, vermell, etc.) són transparents al filtre, de manera que no es reflecteixen en la direcció de l'objectiu. El filtre actua com una placa de filtre d'excitació i, com que la fluorescència de la mostra es troba a la regió de longitud d'ona llarga de la llum visible, es pot observar a través del filtre i arribar a l'objectiu. La brillantor de la imatge de fluorescència augmenta amb l'ampliació i és més forta que la font de llum transmesa a gran augment. A més de la seva funció com a font de llum transmissiva, és més adequat per a l'observació directa d'exemplars opacs i semitransparents, com ara plaques gruixudes, membranes de filtre, colònies, mostres de cultiu de teixits, etc. En els últims anys, els microscopis de fluorescència de recent desenvolupament sovint Utilitzeu dispositius de llum caiguda, coneguts com microscopis de fluorescència de llum caiguda.
