El principi i les característiques estructurals de la microscòpia de fluorescència
La microscòpia de fluorescència utilitza un punt amb alta eficiència lluminosa per emetre una certa longitud d'ona de llum (com ara llum ultraviolada de 3650 polzades o llum blava violeta de 4200 polzades) a través d'un sistema de filtrat de color com a llum d'excitació i excita les substàncies fluorescents de la mostra per emetre diverses colors de fluorescència. Després d'això, s'observa mitjançant la ampliació de la lent de l'objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, és fàcil de reconèixer fins i tot quan la fluorescència és molt feble sobre un fons fort, amb alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a l'estudi de l'estructura i la funció cel·lular, així com per a la composició química. L'estructura bàsica d'un microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic normal i d'accessoris com ara una font de llum fluorescent, un filtre d'excitació, un separador de feix dicroic i un filtre de bloqueig. Les fonts de llum fluorescents solen utilitzar làmpades de mercuri d'ultra alta pressió (50-200W), que poden emetre llum de diferents longituds d'ona. Tanmateix, cada substància fluorescent té una longitud d'ona de llum d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que cal afegir filtres d'excitació (normalment filtres d'excitació ultraviolats, morats, blaus i verds) per permetre que només una certa longitud d'ona de llum d'excitació penetri i irradiï el mostra, mentre absorbeix tota la resta de llum. Després de ser irradiada per llum d'excitació, cada substància emet una fluorescència visible més llarga que la longitud d'ona d'irradiació en molt poc temps. La fluorescència té especificitat i és generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar una fluorescència específica, cal afegir bloqueig (o supressió) darrere de la lent de l'objectiu i utilitzar-lo en combinació.
Diferència entre microscopi de fluorescència i microscopi normal
1. El mètode d'il·luminació sol ser un tipus de feix descendent, en què la font de llum es projecta sobre la mostra a través d'una lent objectiu;
2.La font de llum és llum ultraviolada, amb una longitud d'ona més curta i una resolució més alta que els microscopis normals;
3. Hi ha dos filtres especials, el que està davant de la font de llum s'utilitza per filtrar la llum visible, i el que està entre l'ocular i la lent de l'objectiu s'utilitza per filtrar els raigs ultraviolats per protegir l'ull humà.
La microscòpia de fluorescència també és un tipus de microscòpia òptica, amb la principal diferència en les diferents longituds d'ona d'excitació. Això determina les diferències d'estructura i ús entre la microscòpia fluorescent i la microscòpia òptica ordinària.
La microscòpia de fluorescència és una eina bàsica per a la citoquímica d'immunofluorescència. Es compon de components principals com una font de llum, un sistema de plaques de filtre i un sistema òptic. Utilitza una certa longitud d'ona de llum per excitar la mostra per emetre fluorescència i la magnifica a través d'un sistema d'ocular i lent objectiu per observar la imatge de fluorescència de la mostra.
