Diversos problemes en l'ús de la microscòpia de contrast de fase:
(1) Inversió de fase quan n'
(2) L'efecte halo i atenuació gradual en el procés d'imatge de la microscòpia de contrast de fase, quan una estructura es torna més fosca a causa del retard de fase, no és una pèrdua de llum, sinó el resultat de la redistribució de la llum al pla de la imatge. Per tant, la llum que desapareix clarament a les zones fosques apareixerà com un halo brillant al voltant dels objectes més foscos. Aquest és un desavantatge de la microscòpia de contrast de fase, que dificulta l'observació d'estructures fines. Quan l'obertura anular és molt estreta, el fenomen del halo és més greu. Un altre fenomen de la microscòpia de contrast de fase és l'efecte d'enfosquiment, que es refereix a una disminució del contrast a les vores d'una àrea més gran amb el mateix retard de fase observat durant l'observació de contrast de fase.
(3) La influència del gruix de la mostra Quan s'observa la diferència, el gruix de la mostra ha de ser de 5 μ m o més prim. Quan s'utilitzen mostres més gruixudes, la capa superior de la mostra és clara, mentre que la capa més profunda serà borrosa i produirà interferències de canvi de fase i interferències de dispersió de la llum.
(4) La influència del vidre de coberta i el portaobjectes sobre la mostra s'ha de cobrir amb un vidre de coberta, en cas contrari, l'anell brillant de l'obertura anular i l'anell fosc de la placa de fase són difícils de superposar. L'observació diferencial també té uns requisits elevats per a la qualitat del vidre de la diapositiva i el vidre de la coberta. Quan hi ha rascades, gruix desigual o desnivell irregular, pot provocar una distorsió de l'anell brillant i una interferència de fase. A més, si el portaobjectes de vidre és massa gruixut o massa prim, farà que l'obertura anular es faci més gran o més petita.
Actualment, els microscopis òptics han evolucionat des dels microscopis biològics tradicionals fins a diversos tipus de microscopis especialitzats. Segons els seus principis d'imatge, es poden dividir en:
① Microscopi òptic geomètric: incloent microscopi biològic, microscopi de llum caiguda, microscopi invertit, microscopi metalogràfic, microscopi de camp fosc, etc.
② Microscopi òptic físic: incloent microscopi de contrast de fase, microscopi de polarització, microscopi d'interferència, microscopi de polarització de contrast de fase, microscopi d'interferència de contrast de fase, microscopi de fluorescència de contrast de fase, etc.
③ Microscopis de conversió d'informació: inclosos microscopis de fluorescència, microespectròmetres, microscopis d'anàlisi d'imatges, microscopis acústics, microscopis fotogràfics, microscopis de televisió, etc.
Enumereu diversos usos dels microscopis: a Microscopi biològic: En general, els microscopis es poden dividir en microscopis estereoscopis i microscopis biològics. A causa de diferents propòsits i requisits, han sorgit moltes branques, però els principis bàsics segueixen sent els mateixos. La polarització, el contrast de fase, la transmissió i la llum caiguda encara es classifiquen com a microscopis biològics. El microscopi estereoscòpic, també conegut com a microscopi anatòmic, microscopi sòlid i microscopi estereoscòpic, és un microscopi versàtil. És fàcil d'operar, té uns requisits baixos per a mostres, té una llarga distància de treball i té un fort sentit de la tridimensionalitat quan s'observa. Es pot utilitzar per observar objectes físics o realitzar algunes operacions sobre exemplars mentre s'observa. En lloc de tallar l'exemplar com un microscopi biològic, el tall requereix la tecnologia i l'equip corresponents. Per tant, els estereomicroscopis tenen una àmplia gamma d'aplicacions en camps com la microelectrònica, el muntatge i manteniment d'instruments de precisió i el microgravat. Molt utilitzada en anatomia i microcirurgia en els camps de la biologia i la medicina (actualment classificats com a microscopis quirúrgics), la font de llum utilitzada en biologia i medicina només pot ser una font de llum freda (fibra òptica); S'utilitza a la indústria per a l'observació, el muntatge, la inspecció i altres treballs de peces petites i circuits integrats. Microscopi metal·logràfic: a moltes persones els agrada escriure'l com a "microscopi metal·logràfic". El microscopi metal·logràfic és un microscopi utilitzat específicament per observar l'estructura metal·logràfica d'objectes opacs com ara metalls i minerals. Aquests objectes opacs no es poden observar en un microscopi de transmissió normal, de manera que la principal diferència entre ells i un microscopi normal és que el primer utilitza llum reflectida, mentre que el segon utilitza llum transmesa per a la il·luminació. En un microscopi metal·logràfic, el feix d'il·luminació es dirigeix des de la lent de l'objectiu a la superfície de l'objecte observat, reflectit per la superfície, i després es torna a la lent de l'objectiu per a la imatge. Aquest mètode d'il·luminació reflectant també s'utilitza àmpliament en la detecció de plaques de silici de circuit integrat.
