Principis i característiques estructurals del microscopi de fluorescència
El microscopi de fluorescència utilitza una font de llum de punt altament eficient per emetre una certa longitud d’ona de llum (com la llum ultraviolada 3650 o la llum blava morada 4200) a través d’un sistema de filtre de colors com a llum d’excitació, que excita substàncies fluorescents en l’exemplar per emetre diversos colors de fluorescència i, a continuació, s’obsereix a través de la ampliació de la lent objectiva i la cellera. D’aquesta manera, fins i tot amb una fluorescència feble en un fons fort, és fàcil de reconèixer i té una alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a l'estudi de l'estructura cel·lular, la funció i la composició química. L’estructura bàsica d’un microscopi de fluorescència es compon d’un microscopi òptic regular i alguns accessoris com una font de llum fluorescent, un filtre d’excitació, un divisor de feixos de doble color i un filtre de bloqueig. Font de la llum fluorescent: sol utilitzar làmpades de mercuri a pressió ultra alta (50-200 w), que poden emetre llum de diverses longituds d’ona, però cada substància fluorescent té una longitud d’ona de llum d’excitació que produeix una fluorescència forta. Per tant, cal afegir filtres d’excitació (normalment filtres d’excitació ultraviolats, morat, blau i verd) per permetre que només una certa longitud d’ona de la llum d’excitació passi i irradia la mostra, alhora que absorbeix tota la resta de llum. Després d’haver estat irradiada amb llum d’excitació, cada substància emet una fluorescència visible amb una longitud d’ona més llarga que la longitud d’ona d’irradiació en un període de temps molt curt. La fluorescència té especificitat i és generalment més feble que la llum d’excitació. Per tal d’observar fluorescència específica, cal afegir un filtre de bloqueig (o suprimir) darrere de la lent objectiva. Les seves funcions són dobles: primer, absorbir i bloquejar la llum d’excitació d’entrar a l’ocular per evitar que es molesti la fluorescència i danyi els ulls; En segon lloc, seleccionar i permetre que la fluorescència específica passi, mostrant un color fluorescent específic. S'han d'utilitzar dos tipus de filtres en combinació.
