Preparació i observació de mostres biològiques per a microscòpia electrònica
La resolució d'un microscopi depèn de la longitud d'ona de la llum utilitzada. El microscopi electrònic, que va començar a aparèixer l'any 1933, utilitza com a font de llum un feix d'electrons amb una longitud d'ona molt més curta que la de la llum visible, de manera que la resolució que pot assolir millora molt en comparació amb la d'un microscopi òptic. La diferència de fonts de llum també determina una sèrie de diferències entre els microscopis electrònics i els microscopis òptics.
Segons les diferències en els principis de la imatge del feix d'electrons i les diferents maneres d'actuar sobre les mostres, els microscopis electrònics moderns s'han desenvolupat en molts tipus. Actualment, els més utilitzats són els microscopis electrònics de transmissió i els microscopis electrònics d'escaneig. L'ampliació total del primer pot estar entre 1000-1000000. L'augment total d'aquest últim pot variar entre 20 i 300,000 vegades. Aquest experiment introdueix principalment la preparació de dos tipus de mostres de microscopi, el microscopi electrònic de transmissió i el microscopi electrònic d'escaneig.
2. Equipament
1. Bacteris Escherichia coli (Escherichia coli) inclinat.
2. Solució o reactiu acetat d'amil, àcid sulfúric concentrat, etanol absolut, aigua estèril, 2% fosfotungstat de sodi (pH 6.5-8.0) solució aquosa, 0.3% polietilè solució de formaldehid (soluble en cloroform), cèl·lules Pigment c, acetat d'amoni, plasmidi pBR322.
3. Instruments o altres estris: microscopi òptic ordinari, malla de coure, embut de porcellana, vas de precipitats, plat, comptagotes estèrils, pinces estèrils, agulles, diapositives, tauler de recompte, màquina de recobriment al buit, assecador de punt crític, etc.
3. Etapes de funcionament
(1) Preparació i observació de mostres per a microscòpia electrònica de transmissió
1. Tractament de malla metàl·lica
La mostra per a la microscòpia òptica es col·loca sobre un portaobjectes de vidre per a la seva observació. Tanmateix, en la microscòpia electrònica de transmissió, com que els electrons no poden penetrar a la làmina de vidre, els materials de malla només es poden utilitzar com a portadors, normalment anomenats xarxes portadores. La malla portadora es pot dividir en moltes especificacions diferents a causa de diferents materials i formes, entre les quals la més utilitzada és la malla de coure 200-400 (nombre de forats). La malla de coure s'ha de tractar abans d'utilitzar-la per eliminar la brutícia i mantenir-la neta, en cas contrari afectarà la qualitat de la pel·lícula de suport i la claredat de les fotos de la mostra. Aquest experiment utilitza una malla de coure de 400-malla, que es pot tractar de la següent manera: primer, remullar-la i blanquejar-la amb acetat d'amil durant diverses hores, després esbandir-la amb aigua destil·lada diverses vegades i després posar-la en remull en etanol absolut durant deshidratació. Si la malla de coure encara no està neta després dels mètodes anteriors, podeu remullar-la en àcid sulfúric concentrat diluït (1:1) durant 1 o 2 minuts, o bullir-la en una solució de NaOH a l'1% durant uns minuts, esbandir-la amb destil·lat. aigua diverses vegades, i després posar-ho en anhidre Deshidratar en etanol i reservar.
2. Preparació de la membrana de suport
Quan s'observen mostres, la xarxa portadora també s'ha de cobrir amb una capa de pel·lícula uniforme no estructurada, en cas contrari, les mostres petites sortiran dels forats de la xarxa portadora. Aquesta pel·lícula se sol anomenar pel·lícula de suport o pel·lícula portadora. La pel·lícula de suport ha de ser transparent d'electrons i el seu gruix en general hauria de ser inferior a 20 nm; sota l'impacte del feix d'electrons, la pel·lícula també hauria de tenir una certa resistència mecànica per mantenir l'estabilitat estructural i tenir una bona conductivitat tèrmica; a més, la xarxa de suport s'hauria d'utilitzar en microscòpia electrònica No hi hauria d'haver cap estructura visible a sota, cap reacció química amb la mostra transportada i cap interferència amb l'observació de la mostra. El seu gruix és generalment d'uns 15 nm. La pel·lícula de suport pot ser pel·lícula de plàstic (com pel·lícula de col·lodió, pel·lícula de polietilè formaldehid, etc.), pel·lícula de carboni o pel·lícula metàl·lica (com pel·lícula de beril·li, etc.). En condicions de treball normals, la pel·lícula de plàstic pot complir els requisits. Entre les pel·lícules de plàstic, la pel·lícula de col·lodió és relativament fàcil de preparar, però la seva resistència no és tan bona com la pel·lícula de polietilè formaldehid.
