Avantatges i desavantatges de la microscòpia d'escaneig làser multifotòn
La microscòpia d'escaneig làser multifotòn és un mètode experimental basat en la tecnologia de microscòpia d'escaneig làser que proporciona capacitats de secció òptica més precises en la visualització 3D. El mètode d'excitació de fluorescència multifotònica utilitza longituds d'ona llargues de llum vermella o infraroja propera per adquirir imatges fluorescents d'alta resolució d'exemplars amb una matança mínima d'exemplars actius, el que el fa adequat per a la imatge de cèl·lules vives, especialment teixits vius gruixuts com ara rodanxes de cervell, embrions, òrgans sencers i fins i tot organismes sencers.
Els avantatges són els següents:
1, l'ús de la llum vermella o l'excitació de la llum infraroja, la dispersió de la llum és petita (la dispersió de partícules petites i la longitud d'ona de la quarta potència de la relació inversa).
2, no requereix un forat, pot recollir més fotons dispersos de la secció transversal de la imatge.
3, el forat no pot distingir entre els fotons dispersos emesos per la regió o l'àrea focal fora de focus, el multifotó en la relació senyal-soroll d'imatge profunda és bona.
4, excitació d'un sol fotó de llum ultraviolada o visible utilitzada al feix per arribar al pla focal abans que la mostra s'absorbeixi i s'atenuï fàcilment, no és fàcil d'excitar profundament.
5, en l'observació del microscopi biològic, * la primera consideració és no danyar l'estat actiu del propi organisme, mantenir l'aigua, la concentració d'ions, l'oxigen i la circulació de nutrients. En ocasions d'observació de la llum, tant l'energia tèrmica com l'energia fotogràfica han de romandre a la cèl·lula sense danyar la quantitat d'irradiació, energia lluminosa.
6, el microscopi multifotó també té molts avantatges. Com ara la resolució tridimensional, la intrusió de profunditat, l'eficiència de dispersió, la llum de fons, la relació senyal-soroll, el control, etc., hi ha microscopis làser anteriors que no tenen o tenen característiques incomparables més enllà de les característiques.
El microscopi d'exploració làser confocal multifocal s'ha estès a diversos camps d'investigació i aplicació. És capaç de fer una observació no destructiva tridimensional de mostres en el seu estat natural i pot millorar la resolució i la relació senyal-soroll del sistema. Utilitzant el canvi de propietats del material després de l'excitació multifotònica, també és possible aconseguir l'emmagatzematge de dades d'alçada tridimensional i la microfabricació tridimensional en qualsevol direcció, que té un alt valor d'aplicació. Es pot creure que amb el desenvolupament de la maquinària, els materials, la tecnologia làser i altres tecnologies relacionades amb la microscòpia confocal multifocal, el microscopi d'exploració làser confocal multifocal tindrà un major desenvolupament i una aplicació més àmplia.
Els desavantatges són els següents:
1, només imatges de fluorescència.
2, si la mostra inclou cromòfors que poden absorbir la llum d'excitació, com ara pigments, la mostra pot estar danyada tèrmicament.
3, la resolució es redueix lleugerament, encara que es pot millorar amb l'ús simultani de l'obertura confocal, però hi haurà pèrdua de senyal.
4. El cost de la microscòpia d'escaneig multifotòn és elevat a causa de la limitació dels làsers ultraràpids cars.
