Coneixements sobre microscòpia de fluorescència confocal
El principi bàsic de la microscòpia de fluorescència confocal: s'utilitza una font de llum puntual per irradiar la mostra i es forma un petit punt de llum ben definit al pla focal. compost de separadors. El divisor de feix envia la fluorescència directament al detector. Hi ha un forat al davant de la font de llum i el detector, respectivament anomenat forat d'il·luminació i forat de detecció. La mida geomètrica dels dos és la mateixa, uns 100-200nm; en relació amb el punt de llum del pla focal, els dos estan conjugats, és a dir, el punt de llum passa per una sèrie de lents i, finalment, es pot enfocar al forat d'il·luminació i al forat de detecció al mateix temps. D'aquesta manera, la llum del pla focal es pot convergir dins de l'abast del forat de detecció, mentre que la llum dispersa des de dalt o per sota del pla focal es bloqueja fora del forat de detecció i no es pot visualitzar. El làser escaneja la mostra punt per punt, i el tub fotomultiplicador després de detectar el forat també obté la imatge confocal del punt de llum corresponent punt per punt, que es converteix en un senyal digital i es transmet a l'ordinador, i finalment s'agrega en una imatge clara. imatge confocal de tot el pla focal a la pantalla.
Cada imatge del pla focal és en realitat una secció transversal òptica de la mostra, i aquesta secció transversal òptica sempre té un cert gruix, també conegut com a secció prima òptica. Com que la intensitat de la llum al punt focal és molt més gran que la del punt no enfocat, i la llum del pla no focal es filtra pel forat, la profunditat de camp del sistema confocal és aproximadament zero i l'exploració al llarg de la Z -l'eix pot realitzar una tomografia òptica, formant un Observeu la secció òptica bidimensional al punt enfocat de la mostra. Combinant l'escaneig del pla XY (pla focal) amb l'escaneig de l'eix Z (eix òptic), la imatge tridimensional de la mostra es pot obtenir acumulant imatges bidimensionals de capes contínues i processades per un programari informàtic especial.
