Introducció als avantatges millorats de la microscòpia multiphoton d’escaneig làser
El microscopi multiphoton d’escaneig làser és una millora significativa de la microscòpia òptica, principalment es manifesta en la capacitat d’observar estructures profundes de cèl·lules vives, cèl·lules fixes i teixits, i obtenir estructures de pla z de diverses capes clares i nítides, a saber, a saber, les llesques òptiques, que es poden utilitzar per construir estructures sòlides tridimensionals d’espectacles. El microscopi confocal utilitza una font de llum làser, que s’amplia per omplir tot el pla focal de la lent objectiva, i després es va convertir en punts molt petits en el pla focal de la mostra a través del sistema de lents de la lent objectiva. Segons l’obertura numèrica de la lent objectiva, el diàmetre del punt d’il·luminació brillant és aproximadament 0. 25-0. 8 μ m, i la profunditat és aproximadament 0. 5-1. La mida del punt confocal està determinada pel disseny del microscopi, la longitud d’ona làser, les característiques objectives, la configuració de l’estat d’unitat d’escaneig i les propietats de la mostra. El rang d’il·luminació i la profunditat d’un microscopi de camp són grans, mentre que la il·luminació d’un microscopi confocal es centra en un punt focal del pla focal. L’avantatge bàsic de la microscòpia confocal és que pot realitzar una secció òptica fina en exemplars fluorescents gruixuts (fins a 5 0 μ m o més), amb un gruix d’aproximadament 0,5 a 1,5 μ m. La sèrie d’imatges de llesques òptiques es poden obtenir movent la mostra cap amunt i cap avall mitjançant el motor pas a l’eix Z del microscopi. La recollida d'informació d'imatge es controla dins del pla * *, sense interferències dels senyals emesos d'altres posicions de l'exemplar. Després d’eliminar la influència de la fluorescència de fons i augmentar la relació senyal-soroll, el contrast i la resolució d’imatges confocals es milloren significativament en comparació amb les imatges de fluorescència d’il·luminació de camp tradicionals. En molts exemplars, els components estructurals complexos entrellacen per formar sistemes complexos, però un cop es poden recollir seccions òptiques suficients, podem utilitzar programari per reconstruir -los en tres dimensions. Aquest mètode experimental ha estat àmpliament utilitzat en investigacions biològiques per dilucidar les complexes relacions estructurals i funcionals entre cèl·lules o teixits.
