Introducció a la microscòpia d'exploració làser multifotònica: avantatges i desavantatges
1. Emocionada per la llum vermella o infraroja, la dispersió de la llum és petita i la dispersió de petites partícules és inversament proporcional a la quarta potència de la longitud d'ona.
2. Es poden recollir més fotons dispersos de la secció transversal de la imatge sense necessitat de forats.
3. Els forats no poden distingir els fotons dispersos emesos de les àrees focals o desenfocades, i els multifotons tenen una millor relació senyal-soroll en imatges profundes.
4. La llum ultraviolada o visible utilitzada per a l'excitació d'un sol fotó és fàcilment absorbida i atenuada per la mostra abans que el feix arribi al pla focal, dificultant l'excitació de les capes profundes.
5. Pel que fa a l'observació de la microscòpia biològica, la primera consideració és no danyar l'estat actiu del propi organisme, mantenir la circulació de l'aigua, la concentració d'ions, l'oxigen i els nutrients. En el camp de l'observació de la llum, tant l'energia tèrmica com la fotònica han de romandre dins de la dosi d'irradiació i l'energia lluminosa que no danyin les cèl·lules.
6. La microscòpia multifotònica té molts avantatges. Pel que fa a resolució tridimensional, invasió de profunditat, eficiència de dispersió, llum de fons, relació senyal-soroll, control, etc., hi ha característiques que els microscopis làser anteriors no posseeixen o no poden superar.
Desavantatges del microscopi d'exploració làser multifotòn:
1. Només per a imatges de fluorescència.
2. Si la mostra inclou cromòfors que poden absorbir llum d'excitació, la mostra pot estar sotmesa a danys tèrmics.
3. La resolució es redueix lleugerament, encara que es pot millorar utilitzant simultàniament petits forats confocals, hi ha pèrdua de senyal.
4. A causa de les limitacions dels làsers ultraràpids cars, el cost dels microscopis d'exploració multifotònica és relativament elevat.
