Com s'observa la morfologia de les cèl·lules microbianes al microscopi?
Els microscopis es van inventar per veure objectes somrients que no es poden veure a ull nu. Els microorganismes són molt petits, per això s'han d'ampliar i observar amb l'ajuda d'un microscopi. A més, hi ha molts tipus de microorganismes, de manera que bàsicament la majoria de microscopis òptics poden observar microorganismes. La següent pregunta és quin tipus de microscopi s'ha d'utilitzar per a l'observació i anàlisi de quin tipus de microorganismes. Els microscopis comuns que es poden utilitzar per observar la morfologia microbiana inclouen microscopis biològics, microscopis de contrast de fase, microscopis invertits, microscopis de fluorescència, microscopis confocals, etc.
A continuació es descriuen els diferents microscopis utilitzats per observar microorganismes:
1. El microscopi òptic ordinari utilitza llum natural o llum com a font de llum, i la seva longitud d'ona és d'aproximadament 0,4 μm. La resolució del microscopi és la meitat de la longitud d'ona, és a dir, 0,2 μm, i la imatge més petita visible a ull nu és 0,2 mm. Per tant, l'ús d'un mirall d'oli (immersió) per augmentar 1000 vegades pot augmentar les partícules de 0,2 μm a 0,2 mm visibles a ull nu. Els microscopis òptics ordinaris es poden utilitzar per a l'observació de bacteris, actinomicets i fongs.
2. La microscòpia de camp fosc s'utilitza habitualment per observar la morfologia i el moviment microbians sense taques. Després d'instal·lar el condensador de camp fosc al microscopi normal, la llum no pot penetrar directament des del centre i el camp de visió és fosc. Quan l'exemplar rep llum obliqua de la vora del condensador, es pot dispersar, de manera que es poden observar microorganismes brillants com ara bacteris o espiroquetes al fons del camp fosc.
3. Microscopi de contrast de fase El microscopi de contrast de fase utilitza l'efecte de llum de la placa de diferència de fase per canviar la fase de llum i l'amplitud de la llum directa i convertir la diferència de fase de la llum en diferència d'intensitat de la llum. Sota un microscopi de contrast de fase, quan la llum passa a través d'una mostra sense tacar, la diferència de fase de llum és causada per la inconsistència de la densitat de diferents parts de l'exemplar, i es pot observar la morfologia, l'estructura interna i el mode de moviment dels microorganismes.
4. Microscopi de fluorescència El microscopi de fluorescència és bàsicament el mateix que el microscopi òptic ordinari, la diferència principal és la font de llum, el filtre i el condensador. En l'actualitat, la majoria d'ells utilitzen dispositius epi-light, i les làmpades de mercuri d'alta pressió s'utilitzen habitualment com a fonts de llum, que poden emetre llum ultraviolada o blava-violada. Hi ha dos tipus de filtres: filtre d'excitació i filtre d'absorció. A més dels condensadors generals de camp brillant, els condensadors de camp fosc també es poden utilitzar en microscopis de fluorescència que utilitzen llum blava per millorar el contrast entre la fluorescència i el fons. Aquest mètode és aplicable a la detecció o identificació de bacteris tenyits amb pigments fluorescents o combinats amb anticossos fluorescents.
5. Els microscopis electrònics utilitzen el flux d'electrons com a font de llum, i la longitud d'ona és desenes de milers de vegades diferent de la llum visible, la qual cosa millora molt la resolució. També utilitza una bobina magnètica com a sistema d'amplificació òptica, i l'augment pot arribar a desenes de milers o centenars de milers de vegades. Sovint s'utilitza per a l'observació de partícules de virus i ultraestructura bacteriana.
Observació de mostres microbianes sense tacar:
Els exemplars sense tacar es poden utilitzar generalment per observar la morfologia, la potència i el moviment dels bacteris. Els bacteris són incolors i transparents quan no estan tacats, i s'observen al microscopi principalment per la diferència entre l'índex de refracció dels bacteris i l'entorn circumdant. Els bacteris amb flagels es mouen vigorosament, mentre que els bacteris sense flagels mostren un moviment brownià irregular. Els bacteris viables com Treponema pallidum, Leptospira i Campylobacter tenen formes i patrons de moviment distintius, que són d'importància diagnòstica. Els mètodes utilitzats habitualment són el mètode de caiguda de pressió, el mètode de caiguda penjant i el mètode capil·lar.
1. Apliqueu vaselina al voltant del forat còncau del vidre còncava net mitjançant el mètode de gota penjant, utilitzeu un bucle d'inoculació per agafar un anell de suspensió bacteriana i col·loqueu-lo al centre del vidre de coberta, després alineeu el forat còncau del vidre còncau amb la caiguda al centre de la coberta de vidre i tapeu-la, després gireu-la ràpidament, premeu lleugerament la coberta de vidre perquè s'enganxi fermament a la vaselina a la vora del forat còncau i observeu amb un microscopi d'alt augment (o camp fosc).
2. Agafeu un anell de suspensió bacteriana amb un bucle d'inoculació i col·loqueu-lo al centre d'un portaobjectes de vidre net mitjançant el mètode de caiguda de pressió, i cobreixi suaument la suspensió bacteriana amb un vidre de cobertura, tenint cura d'evitar bombolles i desbordament de la suspensió bacteriana. . Després d'estar quiet durant uns segons, observeu amb un microscopi d'alta potència en camp brillant (o camp fosc).
3. El mètode capil·lar s'utilitza principalment per a l'examen de la cinètica dels bacteris anaeròbics. Normalment escolliu 60~70mm de llarg. Després de desviar la suspensió de bacteris anaeròbics a través d'un capil·lar amb una obertura de 0,5-1,0 mm, segellar els dos extrems del capil·lar amb una flama. El capil·lar es va fixar al portaobjectes de vidre amb paper de plàstic i es va observar sota una lent d'alta potència en camp fosc.
Observació de mostres de microbis tenyides amb un microscopi:
Després de tacar l'exemplar bacterian, a causa del fort contrast de color entre els bacteris i l'entorn circumdant, les característiques morfològiques dels bacteris (com la mida, la forma, la disposició, etc.) dels bacteris i algunes estructures especials (com ara com a càpsules, flagels, espores, etc.) es poden observar clarament sota un microscopi òptic normal i els bacteris es poden classificar i identificar segons la reactivitat de la tinció.
(1) Procediment general de tinció bacteriana El procediment general de tinció bacteriana és: frotis (assecat)—fixació—tinció.
1. Frotis Preparació de sang, secrecions, excrecions, cultiu de líquids i líquids de punció, i frotis directes de pel·lícula fina sobre portaobjectes de vidre; autòpsia o teixits animals infectats, untar la lesió amb un cotó per a la presa de mostres. Per a la preparació de colònies bacterianes o gespa en medi sòlid, primer utilitzeu un bucle d'inoculació per agafar un anell de solució salina normal i posar-lo al centre del portaobjectes de vidre, després utilitzeu un bucle d'inoculació estèril per prendre una petita quantitat de cultiu i triturar. uniformement en solució salina normal, esteneu-lo en una superfície recoberta d'1 cm2 i deixeu-lo assecar de manera natural a temperatura ambient o assecar-lo lentament a distància.
2. El propòsit de la fixació és matar els bacteris, coagular la proteïna i l'estructura bacteriana i facilitar la tinció; promou que els bacteris s'adhereixin a la diapositiva per evitar que l'aigua s'emporti durant el rentat; canviar la permeabilitat dels bacteris a colorants, que és beneficiós per a la tinció de les estructures intracel·lulars bacterianes. Normalment es fixa escalfant amb una flama, i el frotis sec es passa ràpidament a través de la flama durant 3 vegades. És millor no cremar la pell del dors de la mà quan toca el tobogan.
3. Tintura Segons diferents propòsits d'inspecció, trieu diferents mètodes de tenyit per a la tintura. En tenyir, afegiu la solució de colorant gota a gota per augmentar la cobertura.
4. Mordant Qualsevol substància que pot millorar l'afinitat entre el colorant i l'objecte tenyit, fixar el colorant a l'objecte tenyit i provocar un canvi en la permeabilitat de la membrana cel·lular s'anomena mordent. S'utilitzen habitualment l'alum, l'àcid tànnic, les sals metàl·liques i el iode, etc., i també s'utilitza la calefacció per afavorir la coloració. Els mordants es poden utilitzar entre la tinció primària i la tinció de contrast, i també es poden utilitzar després de la fixació o continguts en el fixador i la tinció.
5. Decoloració Qualsevol agent químic que pugui eliminar el color de l'objecte tenyit s'anomena decolorant. L'etanol, l'acetona, etc. s'utilitzen habitualment com a decolorants. L'agent decolorant pot detectar el grau d'estabilitat de la combinació de bacteris i colorants, que es pot utilitzar per a la tinció diferencial.
6. Contratinció Els bacteris o les seves estructures que s'han decolorat sovint es taquen amb una solució de contrast per a una fàcil observació. El color de la solució de tintura de contrast és diferent del de la solució de tintura primària per formar un contrast agut. La tinció de contrast no ha de ser massa forta, per no tapar el color de la tinció inicial.
