Com es diferencia la microscòpia de fluorescència de la microscòpia làser confocal
Microscopi de fluorescència
1. Un microscopi de fluorescència utilitza llum ultraviolada com a font de llum per il·luminar l'objecte que s'inspecciona per fer-lo emetre fluorescència, i després observar la forma i la ubicació de l'objecte sota el microscopi. La microscòpia de fluorescència s'utilitza per estudiar l'absorció i el transport de substàncies dins de les cèl·lules, així com la distribució i el posicionament de les substàncies químiques. Algunes substàncies de les cèl·lules, com la clorofil·la, poden emetre fluorescència després de ser irradiades pels raigs ultraviolats; algunes substàncies no poden fluorescència, però si es tenyeixen amb colorants fluorescents o anticossos fluorescents, poden emetre fluorescència després de la irradiació amb raigs ultraviolats. La microscòpia de fluorescència és una de les eines per a la investigació qualitativa i quantitativa d'aquestes substàncies.
2. Principi del microscopi de fluorescència:
(A) Font de llum: la font de llum irradia llum de diverses longituds d'ona (des de l'ultraviolat fins a l'infraroig).
(B) Font de llum del filtre d'excitació: transmet llum d'una longitud d'ona específica que pot provocar fluorescència de l'exemplar, alhora que bloqueja la llum que no serveix per estimular la fluorescència.
(C) Espècimens fluorescents: generalment tenyits amb pigments fluorescents.
(D) Filtre de bloqueig: bloqueja la llum d'excitació que no és absorbida per la mostra i transmet selectivament la fluorescència. Algunes longituds d'ona de la fluorescència també es transmeten selectivament. Un microscopi que utilitza llum ultraviolada com a font de llum per fer que l'objecte il·luminat tingui fluorescència. El microscopi electrònic es va muntar per primera vegada el 1931 a Berlín, Alemanya per Knorr i Hallowska. Aquest microscopi utilitza un feix d'electrons d'alta velocitat en lloc d'un feix de llum. Com que la longitud d'ona del flux d'electrons és molt més curta que la de la llum, l'ampliació del microscopi electrònic pot arribar a 800,000 vegades i el límit de resolució mínima és de 0,2 nanòmetres. El microscopi electrònic d'escaneig, que es va començar a utilitzar l'any 1963, permet a la gent veure les petites estructures a la superfície dels objectes.
3. Àmbit d'aplicació: S'utilitza per ampliar imatges d'objectes petits. S'utilitza generalment en l'observació de biologia, medicina, partícules microscòpiques, etc.
microscopi confocal
1. El microscopi confocal afegeix una semilent semireflectant al camí òptic de la llum reflectida, que refracta la llum reflectida que ha passat per la lent cap a altres direccions. Hi ha un deflector amb un forat al focus, i el forat es troba al punt focal, darrere del deflector, hi ha un tub fotomultiplicador. Es pot imaginar que la llum reflectida abans i després del focus de la llum de detecció passa per aquest sistema confocal i no es pot enfocar al petit forat, i serà bloquejada pel deflector. Així, el que mesura el fotòmetre és la intensitat de la llum reflectida al focus.
2. Principi: els microscopis òptics tradicionals utilitzen fonts de llum de camp, i la imatge de cada punt de l'exemplar serà interferida per difracció o llum dispersa des de punts adjacents; Els microscopis confocals d'escaneig làser utilitzen raigs làser per formar fonts de llum puntuals mitjançant forats il·luminats per il·luminar l'interior de la mostra. Cada punt del pla focal s'escaneja i el punt il·luminat de l'exemplar s'imatge al forat de detecció, que es rep punt per punt o línia per línia pel tub fotomultiplicador (PMT) o el dispositiu d'acoblament en fred (cCCD) darrere de la detecció. forat, i és ràpidament Es forma una imatge fluorescent a la pantalla del monitor de l'ordinador. El forat d'il·luminació i el forat de detecció es conjuguen en relació amb el pla focal de la lent de l'objectiu. Els punts del pla focal se centren en el forat d'il·luminació i el forat d'emissió alhora. Els punts fora del pla focal no s'imaginaran al forat de detecció. Això s'obté Les imatges confocals són seccions transversals òptiques d'exemplars, superant les deficiències de les imatges borroses en els microscopis ordinaris.
3. Camps d'aplicació: implicant medicina, investigació científica animal i vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia cel·lular, embriologia de teixits, ciència dels aliments, genètica, farmacologia, fisiologia, òptica, patologia, botànica, neurociència, biologia marina i ciència dels materials, ciència electrònica. , mecànica, geologia del petroli, mineralogia.
