Els microscopis de fluorescència es poden dividir en dos tipus segons el principi de la trajectòria de la llum:
1. Microscopi de fluorescència de transmissió
En els microscopis de fluorescència més antics, la font de llum d'excitació travessa el material de la mostra a través d'un condensador per excitar la fluorescència. L'avantatge és que la fluorescència és forta amb un augment baix, però el desavantatge és que la fluorescència es debilita a mesura que augmenta la magnificació. Per tant, només és adequat per observar materials d'exemplars més grans.
2.Microscòpia d'epifluorescència
La llum d'excitació cau cap avall des de la lent de l'objectiu a la superfície de la mostra, és a dir, s'utilitza la mateixa lent objectiu que el condensador d'il·luminació i la lent objectiu per recollir la fluorescència.
Cal afegir un divisor de feix dicroic (mirall dicroic) al camí òptic, que es troba en un angle de 45o amb l'eix òptic. La llum d'excitació es reflecteix a la lent de l'objectiu i es concentra a la mostra. La fluorescència generada per la mostra es reflecteix per la superfície de la lent de l'objectiu i la coberta. La llum d'excitació reflectida a la superfície de la diapositiva de vidre entra a la lent de l'objectiu alhora i torna al divisor de feix dicroic per separar la llum d'excitació i la fluorescència. La llum d'excitació restant és llavors absorbida pel filtre de bloqueig. Si utilitzeu diferents insercions de combinació de filtres d'excitació/divisor de feix de doble color/filtre de bloqueig, podeu satisfer les necessitats de diferents productes de reacció de fluorescència.
L'avantatge d'aquest tipus de microscopi de fluorescència és que el camp de visió s'il·lumina uniformement, la imatge és clara i com més gran sigui l'augment, més forta serà la fluorescència.
Quines són les principals categories de microscopis òptics?
1. Microscopi òptic ordinari
Els microscopis òptics ordinaris es componen principalment de les parts següents: el sistema d'il·luminació, que inclou la font de llum i el condensador; el sistema d'augment òptic, que es compon de la lent de l'objectiu i l'ocular. És la part més crítica del microscopi i està dissenyada per evitar l'aberració esfèrica excessiva i l'aberració cromàtica, tant l'ocular com la lent de l'objectiu estan formats per grups de lents complexos.
2. Microscopi làser d'exploració confocal
El microscopi d'exploració confocal làser sona molt alt i complicat. De fet, simplement utilitza el làser com a font de llum d'escaneig per escanejar i imatge ràpidament objectes punt per punt, línia per línia i superfície per superfície.
A partir de la longitud d'ona més curta del feix làser, el feix en si és molt prim, cosa que determina que el microscopi d'escaneig làser confocal té una alta resolució, que és aproximadament tres vegades la d'un microscopi òptic normal. Aquest tipus de microscopi s'utilitza per observar la morfologia cel·lular i analitzar quantitativament components bioquímics intracel·lulars i mesurar la morfologia cel·lular.
3. Microscopi de camp fosc
Hi ha una placa de llum al centre del condensador d'un microscopi de camp fosc, que impedeix que la llum d'il·luminació entri directament a la lent de l'objectiu. Només la llum reflectida i difractada per l'espècimen pot entrar a la lent de l'objectiu. Per tant, el fons del camp de visió és negre i les vores dels objectes són brillants.
