El microscopi de fluorescència utilitza mètodes i precaucions
Mètode d'ús:
(1) Col·loqueu la làmina de material a l'etapa de transport.
(2) Enceneu el regulador de tensió del microscopi de fluorescència. A continuació, premeu el grup d'inici per encendre la làmpada UV no s'apagarà durant 15 minuts i no es reiniciarà durant 3 minuts després d'apagar-la.
(3) Gireu el filtre d'excitació a v, pel·lícula dicroica a v, trieu un filtre de bloqueig de 495 o 475 nm.
(4) Trieu uvFL40, uvFL100 microscòpia de lents objectius de fluorescència.
(5) Afegiu oli no fluorescent a la diapositiva, primer 40 x, i després 100 x microscòpia de focalització. Mostra fluorescència.
(7) Com que el material fluorescent per irradiació ultraviolada amb el creixement de la fluorescència es va debilitar gradualment amb el pas del temps, de manera que l'examen microscòpic s'hauria de canviar amb freqüència el camp de visió.
(8) també pot utilitzar material de microscòpia de baix augment uvFL10 o uvFL20 (amb augment baix sense afegir oli no fluorescent).
Mètode d'enregistrament d'imatges de fluorescència:
Imatge de fluorescència vista amb un microscopi de fluorescència, una té característiques morfològiques, la segona és amb el color i la brillantor de la fluorescència, per jutjar els resultats, els dos s'han de combinar amb un judici exhaustiu. Els resultats es registren segons indicadors subjectius, és a dir, mitjançant l'observació visual per part del treballador. Com a observació qualitativa general, bàsicament fiable. Amb el desenvolupament de la tecnologia i la ciència, en diferents graus, l'ús d'indicadors objectius per registrar els resultats del judici, com ara l'ús d'espectrofotòmetre cel·lular, analitzador d'imatges i altres instruments. Tanmateix, els resultats registrats per aquests instruments també s'han de combinar amb un judici subjectiu.
La tecnologia de fotografia de microscopi de fluorescència és molt necessària per gravar imatges de fluorescència, ja que la fluorescència és fàcil d'esvair i debilitar, per registrar instantàniament els resultats de la fotografia. El mètode és bàsicament el mateix que la micrografia ordinària. Només cal utilitzar pel·lícules fotogràfiques d'alta velocitat com ara ASA200 a dalt o 24. a dalt. Com que la llum ultraviolada a l'efecte d'explosió de fluorescència, com ara els marcadors FITC, en la irradiació de llum ultraviolada 30s, la brillantor de la fluorescència es redueix en un 50%. Per tant, la velocitat d'exposició és massa lenta per capturar la imatge de fluorescència. Els microscopis de fluorescència d'investigació general tenen dispositius de sistema de microfotografia semiautomàtics o totalment automàtics.
Precaucions:
(1) Funcioneu d'acord estricte amb els requisits del manual de fàbrica del microscopi de fluorescència, no canvieu el procediment arbitràriament.
(2) La inspecció s'ha de dur a terme a la cambra fosca. Després d'entrar a la cambra fosca, connecteu la font d'alimentació, enceneu la làmpada de mercuri d'ultra-alta pressió durant 5-15min, espereu fins que la font de llum emeti una llum forta per estabilitzar-se i els ulls s'adaptin completament a la cambra fosca i després comenceu a observar l'exemplar.
(3) Per evitar danys als ulls per la llum ultraviolada, s'han de portar ulleres protectores quan s'ajusta la font de llum.
(4) comproveu el temps cada vegada que sigui adequat a 1 ~ 2 h, més de 90 minuts, la intensitat lluminosa de la llum de mercuri d'ultra-alta pressió disminueix gradualment, la fluorescència es debilita; exemplars irradiats per llum ultraviolada 3 ~ 5 min, la fluorescència també es debilita significativament; per tant, * no serà superior a 2 ~ 3 h.
(5) La vida útil de la font de llum del microscopi de fluorescència és limitada, l'exemplar ha de ser una inspecció centralitzada per estalviar temps i protegir la font de llum. Quan fa calor, s'ha d'afegir el refredament del ventilador, la bombeta nova s'ha de registrar des del començament de l'ús del temps. Quan el llum s'apaga i es vulgui fer servir de nou, la bombeta s'ha de refredar prou abans d'encendre'l. La font de llum s'ha d'evitar diverses vegades.
(6) Observeu la mostra immediatament després de la tinció, ja que la fluorescència anirà disminuint gradualment amb el temps. Si la mostra es col·loca en una bossa de plàstic de polietilè emmagatzemada a 4 graus, pot retardar el temps de debilitament de la fluorescència i evitar l'evaporació de l'agent de segellat.
(7) Criteris de judici per a la brillantor de la fluorescència: generalment es divideix en quatre nivells, és a dir, "un" - cap fluorescència o és feble visible. '+' - només fluorescència visible clara. "+ +" - visible amb una brillantor
