Diferències i característiques del microscopi de fluorescència i del microscopi òptic ordinari
El microscopi de fluorescència i el microscopi òptic ordinari són diferents, no és a través de la il·luminació de la font de llum ordinària per observar l'exemplar, sinó l'ús d'una determinada longitud d'ona de la llum (generalment ultraviolada, llum blava-violada) excitació del material fluorescent dins de la mostra. sota el microscopi, de manera que la fluorescència de la font de llum del microscopi de fluorescència no reprodueixi una il·luminació directa, sinó com una mena d'excitació de material fluorescent dins de la mostra de la font d'energia. El motiu pel qual podem observar l'exemplar no es deu a la il·luminació de la font de llum, sinó al fenomen de fluorescència que presenta el material fluorescent de la mostra després d'absorbir l'energia lluminosa d'excitació. Es pot veure que les característiques del microscopi de fluorescència, principalment la seva font de llum, poden subministrar un gran nombre de longituds d'ona específiques de la llum d'excitació, de manera que el material fluorescent dins de la mostra examinada pot obtenir la intensitat necessària de la llum d'excitació. Al mateix temps, el microscopi de fluorescència ha de tenir un sistema de filtre corresponent. El microscopi de fluorescència és l'eina bàsica per a la histoquímica de fluorescència. Es compon d'una font de llum d'ultra-alta pressió, un sistema de filtre (inclosa la placa de filtre d'excitació i supressió), un sistema òptic i un sistema fotogràfic i altres components principals, és l'ús d'una certa longitud d'ona de llum per estimular la mostra per emetre fluorescència.
1. La forma d'excitació de fluorescència: segons el rang de longitud d'ona de la llum es divideix en mètode d'excitació UV (utilitzant il·luminació ultraviolada) i mètode d'excitació BV (utilitzant llum blava violeta) dos tipus de mètode d'excitació UV és més curt que 400 nm prop de la llum ultraviolada per excitació. No hi ha llum d'excitació visible en aquest mètode, de manera que la fluorescència observada mostra la fluorescència inherent del colorant, i és fàcil distingir la fluorescència específica de la mostra de l'autofluorescència del teixit de fons.
2. Mètode d'excitació BV: el mètode es centra en 404 nm, 434 nm des de la llum ultraviolada fins a la blava per a l'excitació. Aquest mètode utilitza llum blava per irradiar la mostra, de manera que el filtre de tall del sistema d'observació de fluorescència ha d'utilitzar un filtre que pugui bloquejar completament la llum blava i pugui passar adequadament la fluorescència verda i groga desitjada. Pigments fluorescents per al mètode d'anticossos fluorescents. Atès que la longitud d'ona de la màxima absorció de la llum d'excitació i la longitud d'ona de l'emissió màxima de la fluorescència estan a prop l'una de l'altra, els filtres utilitzats en el mètode d'excitació BV han de ser filtres de tall nítids. Aquest mètode utilitza llum blava com a llum d'excitació, de manera que l'eficiència d'absorció del fluorocrom és més alta i es pot obtenir una imatge més brillant. El desavantatge és que la fluorescència per sota de 500 nm no es pot veure, i per sobre de 500 nm tota la imatge apareix de color groc. En el mètode d'anticossos fluorescents, la major part de l'especificitat es jutja pel color únic del fluorocrom, de manera que els desavantatges del mètode d'excitació BV descrit anteriorment tendeixen a ser extremadament influents quan es parla de l'especificitat subtil.
