Diferències entre la microscòpia de fluorescència i la microscòpia confocal
microscopi de fluorescència
1. El microscopi de fluorescència utilitza llum ultraviolada com a font de llum per irradiar l’objecte que s’inspecciona, fent que emeti fluorescència i, a continuació, observeu la forma i la posició de l’objecte al microscopi. La microscòpia de fluorescència s’utilitza per estudiar l’absorció, el transport, la distribució i la localització de substàncies dins de les cèl·lules. Algunes substàncies en cèl·lules, com la clorofil·la, poden fluoritzar quan s’exposen a la radiació ultraviolada; També hi ha algunes substàncies que no poden emetre fluorescència, però també poden emetre fluorescència si es tacen amb colorants fluorescents o anticossos fluorescents i irradiats amb llum ultraviolada. La microscòpia de fluorescència és una de les eines per a investigacions qualitatives i quantitatives sobre aquestes substàncies.
2. Principi de microscopi de fluorescència:
(A) Font de la llum: la font de llum emet llum de diverses longituds d'ona (des d'Ultraviolet fins a infrarojos).
(B) Font de llum del filtre d’excitació: transmissió de la llum d’una longitud d’ona específica que pot causar fluorescència en l’exemplar, alhora que bloqueja la llum inútil per a una fluorescència emocionant.
(C) Exemplars fluorescents: normalment tacats amb pigments fluorescents.
(D) Filtre de bloqueig: transmet selectivament la fluorescència bloquejant la llum d’excitació que no s’absorbeix per l’exemplar, i algunes longituds d’ona de la fluorescència també es transmeten selectivament. Un microscopi que utilitza llum ultraviolada com a font de llum per fer que l'objecte il·luminat emeti fluorescència. El microscopi electrònic es va reunir per primera vegada per Knorr i Haruska a Berlín, Alemanya el 1931. Aquest microscopi utilitza bigues d’electrons d’alta velocitat en lloc de bigues de llum. A causa de la longitud d'ona molt més curta del flux d'electrons en comparació amb les ones de llum, la ampliació d'un microscopi electrònic pot arribar a 8 0 0000 vegades, amb un límit de resolució mínim de 0,2 nanòmetres. El microscopi electrònic d’escaneig, que es va utilitzar per primera vegada el 1963, permet a les persones veure les petites estructures a la superfície dels objectes.
3. Àmbit d'aplicació: s'utilitza per ampliar imatges d'objectes petits. Generalment s’utilitza per a observacions de biologia, medicina, partícules microscòpiques, etc.
microscopi confocal
1. El microscopi confocal afegeix una mitja lent semi -reflectant a la ruta de llum reflectida, que desvia la llum reflectida que ha passat per la lent en altres direccions. En el seu punt focal, hi ha un desconcert amb un forat situat al punt focal, i darrere del deflector hi ha un tub fotomultiplicador. Es pot imaginar que la llum reflectida abans i després de l’enfocament de la llum de detecció no es pot centrar en el forat petit a través d’aquest sistema confocal i que serà bloquejada pel deflector. De manera que el fotòmetre mesura la intensitat de la llum reflectida en el punt focal.
2. Principi: Els microscopis òptics tradicionals utilitzen fonts de llum de camp i la imatge de cada punt de la mostra es veu afectada per la difracció o la llum dispersa des dels punts veïns; El microscopi confocal d’escaneig làser utilitza un feix làser per il·luminar un forat i formar una font de llum puntual per escanejar tots els punts del pla focal de la mostra. El punt il·luminat de l'exemplar s'imagina al forat de detecció i és rebut el punt o la línia per un tub fotomultiplicador (PMT) o un dispositiu d'acoblament en fred (CCCD) després de detectar el forat, formant ràpidament una imatge de fluorescència a la pantalla del monitor de l'ordinador. El forat d’il·luminació i el forat de detecció són conjugats en relació amb el pla focal de la lent objectiu. Els punts del pla focal es centren simultàniament en el forat d’il·luminació i el forat d’emissió, i els punts fora del pla focal no s’imaginaran al forat de detecció. La imatge confocal resultant és la secció òptica de la mostra, superant el desavantatge de les imatges borroses en microscopis generals.
