Diferències i avantatges i desavantatges entre la microscòpia de fluorescència de transmissió i la microscòpia de fluorescència de reflexió
1. Microscopi de fluorescència de transmissió: la font de llum d'excitació es transmet a través del material de la mostra a través d'un condensador per excitar la fluorescència. Els concentradors de camp fosc d'ús habitual, o els concentradors normals, es poden utilitzar per ajustar el reflector per convertir la llum d'excitació i la llum lateral a la mostra. Aquest és un microscopi de fluorescència relativament antic. El seu avantatge és una forta fluorescència a baix augment, mentre que el seu desavantatge és que la seva fluorescència es debilita amb l'augment de l'augment. Per tant, és millor observar materials d'exemplars més grans.
2. Microscopi de fluorescència de feix caiguda: Aquest és un nou tipus de microscopi de fluorescència que s'ha desenvolupat en els temps moderns. A diferència de l'anterior, la llum d'excitació cau des de la lent de l'objectiu a la superfície de la mostra, utilitzant la mateixa lent objectiu que el condensador d'il·luminació i la lent objectiu per recollir la fluorescència. Cal afegir un separador de feix de color dual al camí òptic, que forma un angle de 45 graus amb el fotourani. La llum d'excitació es reflecteix a la lent de l'objectiu i es recull a la mostra. La fluorescència generada per la mostra i la llum d'excitació reflectida per la superfície de la lent de l'objectiu i el vidre de la coberta entren simultàniament a la lent de l'objectiu i tornen al separador de feix de color dual, separant la llum d'excitació i la fluorescència. La llum d'excitació residual és llavors absorbida pel filtre de bloqueig. Si s'utilitzen diferents combinacions de filtres d'excitació, separadors de feix de color dual i filtres de bloqueig, poden satisfer les necessitats de diferents productes de reacció fluorescent. Els avantatges d'aquest microscopi fluorescent són la il·luminació uniforme del camp de visió, imatges clares i una fluorescència més forta amb un augment més elevat.
Els avantatges i els inconvenients de la microscòpia de fluorescència de transmissió
Font de llum: làmpada de mercuri d'alta pressió o làmpada halògena.
Mirall de focus: utilitzant un focus de camp fosc per separar l'excitació i la fluorescència.
Lent objectiu: es pot utilitzar qualsevol tipus de lent objectiu.
Espècimen: els exemplars prims són més adequats per a l'observació de transmissió.
Avantatges: ① A causa de l'ús d'un condensador de camp fosc, la llum d'excitació no pot entrar a la lent de l'objectiu, de manera que és fàcil formar un fons fosc i aconseguir un bon contrast, i qualsevol lent objectiu es pot utilitzar per a l'observació. ② Quan s'utilitza un objectiu de baix augment, és més brillant que un microscopi de fluorescència reflectant.
Desavantatge: el centre i l'alçada del focus s'han d'ajustar correctament, en cas contrari no es pot obtenir una imatge fluorescent brillant. A causa de la limitació de la distància focal del focus de camp fosc, no es poden utilitzar làmines de vidre gruixudes. L'àrea d'il·luminació del camp de visió no ha de ser massa gran, en cas contrari pot provocar que el color de fluorescència de la mostra fluorescent s'esvaeixi. Els exemplars gruixuts o opacs no són adequats.
Els avantatges i els desavantatges de la microscòpia de fluorescència reflectiva
Font de llum: làmpada de mercuri d'alta pressió o làmpada halògena.
Lent d'enfocament: com que la lent de l'objectiu serveix com a lent d'enfocament, no hi ha necessitat d'una lent d'enfocament.
Lent objectiu: la lent objectiu utilitzada ha de ser capaç de transmetre suficient llum ultraviolada i no produir fluorescència per si mateixa, sense limitació de l'obertura numèrica.
Exemplar: Es poden observar tant exemplars gruixuts com opacs.
Avantatges: ① Com que la lent de l'objectiu també serveix de focus, no requereix gaire ajust. ② Mitjançant l'ús del mètode d'il·luminació Kolar, es poden utilitzar els efectes de l'obertura i les obertures del camp de visió. L'obertura numèrica de la lent de l'objectiu no està limitada i també es poden obtenir imatges d'alta resolució a gran augment. També es poden obtenir mostres gruixudes o opacs. observat, i també es poden utilitzar cobertors gruixuts Altres mètodes d'observació també es poden combinar amb fluorescència reflectida, especialment amb el mètode de diferència de fase i el mètode d'interferència diferencial de transmissió Pot evitar un fenomen d'esvaïment del color de fluorescència innecessari.
Desavantatge: quan s'utilitza un objectiu d'ampliació del sòl, la imatge és relativament fosca, per la qual cosa s'ha d'utilitzar un objectiu d'obertura numèrica alta. El sistema de filtre ha de separar efectivament la luminescència d'excitació i la fluorescència.,
