Determinació de la població microbiana: mètode de recompte microscòpic directe!
I. Finalitat Requisits
1, per aclarir el principi del recompte de plaques d'hematocrit.
2, Domineu el mètode de recompte microbià mitjançant placa d'hematocrit.
II. Principis bàsics
El mètode de recompte directe al microscopi és una petita quantitat de suspensió de la mostra que s'ha de provar en un portaobjectes especial amb una àrea i un volum definits (també conegut com a comptador bacteriològic), comptant directament al microscopi un mètode senzill, ràpid i intuïtiu. Actualment, els comptadors bacteriològics nacionals i estrangers d'ús habitual són: placa de recompte de cèl·lules sanguínies, comptadors bacteriològics Peteroff-Hauser i comptadors bacteriològics Hawksley, etc., que es poden utilitzar per a llevats, bacteris, espores de floridura i altres suspensions de recompte, el principi bàsic. és el mateix. Els dos darrers tipus de comptadors tenen un volum total de 0.02 mm3 després de posar-se el cobreobjectes, i la distància entre el cobreobjectes i la roda de suport és només de 0,02 mm, de manera que les cel·les més petites com ara Els bacteris es poden observar i comptar amb un objectiu d'immersió en oli. A més de l'ús d'aquests comptadors, també hi ha un mètode d'estimació de la relació entre l'àrea de frotis i l'àrea de camp de visió observada directament al microscopi, que s'utilitza generalment per a l'examen bacteriològic de la llet de vaca. Els avantatges del mètode de recompte directe al microscopi són intuïtius, ràpids i fàcils d'utilitzar. Tanmateix, l'inconvenient d'aquest mètode és que el resultat sol ser la suma d'organismes vius i morts. Hi ha alguns mètodes per superar aquest inconvenient, com ara la combinació de cultiu de microcambra tenyit de bacteris vius (poc temps) i l'addició d'inhibidors de citocinesi per aconseguir el propòsit de comptar només organismes vius.
Etapes de l'operació
1, Preparació de la suspensió bacteriana
Utilitzeu solució salina estèril per fer una suspensió bacteriana de llevat de cervesa amb la concentració adequada.
2, cambra de recompte de miralls
Abans d'afegir mostres, primer s'ha d'inspeccionar la cambra de recompte de la placa de recompte. Si hi ha brutícia, cal netejar-la i assecar-la abans de comptar.
3, afegint mostres
Netegeu i assequeu la placa de recompte de cèl·lules sanguínies coberta amb un cobreobjectes i, a continuació, utilitzeu una bureta capil·lar estèril per sacsejar la suspensió de llevat de cervesa des de la vora del cobreobjectes per deixar caure una petita gota, de manera que el líquid bacterià al llarg de la bretxa per penetració capil·lar al cambra de recompte automàticament, generalment la cambra de recompte es pot omplir amb líquid bacterià. Quan es prenen mostres, primer s'ha de sacsejar bé la solució bacteriana; en afegir mostres, la cambra de recompte no hauria de tenir bombolles d'aire.
4, recompte de microscopis
Després d'afegir la mostra, deixeu-la reposar durant 5 minuts, després col·loqueu la placa de recompte de cèl·lules sanguínies a l'etapa del portador del microscopi, primer trobeu la ubicació de la cambra de recompte amb un augment baix i, a continuació, canvieu-la a un augment alt per comptar. Ajusteu la intensitat de la llum del microscopi adequadament, perquè el microscopi amb una llum reflectora també ha de prestar atenció a que la llum no s'hauria de desviar cap a un costat, en cas contrari, el camp de visió no és fàcil d'aclarir la línia de quadrícula de la cambra de comptatge clara, o només veu la línia vertical o només veu la línia horitzontal. Si es troba que el líquid bacterià és massa espès o massa prim abans de comptar, cal reajustar la dilució abans de comptar. Són adequats els requisits generals de dilució de la mostra d'entre 5 i 10 bacteris a cada cèl·lula. Per a cada cambra de recompte, es seleccionen els organismes en 5 compartiments centrals (4 cantonades i un compartiment central al centre) per al recompte. Els organismes situats a les línies de la quadrícula solen comptar només a les línies superior i dreta. En el cas de la brotació del llevat, quan el cos de brot arriba a la meitat de la mida de la cèl·lula mare, es compta com a dos organismes. Comptar una mostra de les dues cambres de recompte en el valor mitjà per calcular el contingut bacterià de la mostra.
5. Neteja de la placa d'hematocrit
Després de l'ús, esbandiu la placa de recompte de cèl·lules sanguínies amb aigua sota l'aixeta, no utilitzeu objectes durs per rentar i raspallar-la, assequeu-la vosaltres mateixos o utilitzeu un assecador de cabells per assecar-la després del rentat. Inspeccioneu la placa microscòpicament per veure si hi ha organismes residuals o altres precipitats a cada compartiment. Si no està net, s'ha de repetir el rentat fins que estigui net.
