Comparació del microscopi confocal i el microscopi òptic ordinari
El microscopi és l'eina principal per observar les cèl·lules. Segons la font de llum, es pot dividir en dues categories: microscopi òptic i microscopi electrònic. El primer utilitza la llum visible (del microscopi ultraviolat a la llum ultraviolada) com a font de llum, mentre que el segon utilitza un feix d'electrons com a font de llum. El microscopi òptic ordinari i el microscopi confocal làser pertanyen al mateix microscopi òptic.
I. Microscopi Òptic General
El microscopi biològic ordinari consta de tres parts, a saber: ① sistema d'il·luminació, inclosa la font de llum i el condensador; ② El sistema d'ampliació òptic, format per objectius i oculars, és el cos principal del microscopi, per tal d'eliminar l'aberració esfèrica i l'aberració cromàtica, els oculars i els objectius estan formats per un grup de lents complexos; ③ dispositiu mecànic, utilitzat per fixar el material i l'observació de conveniència.
L'objecte del microscopi és clar no només determinat per l'ampliació, sinó també amb el poder de resolució del microscopi (resolució), el poder de resolució es refereix al microscopi (o l'ull humà de l'objectiu de 25 cm) pot distingir l'objecte zui petits intervals de la capacitat de distingir la mida del poder de resolució està determinada per la longitud d'ona de la llum i la velocitat de la boca del mirall i l'índex de refracció del medi, expressat en la fórmula:
R=0,61λ /NANA=nsin /2 on: n=l'índex de refracció del medi;=l'angle de la boca del mirall (mostra a la boca de la lent de l'objectiu de l'angle de tensió), NA=velocitat de la boca del mirall (obertura numèrica). L'angle de la boca del mirall sempre ha de ser inferior a 180?, de manera que el valor zui de sina/2 és necessàriament inferior a 1.
L'índex de refracció del vidre utilitzat en la producció de lents òptiques és d'1,65 ~ 1,78, l'índex de refracció del medi utilitzat com més a prop del vidre millor. Per a una lent d'objectiu seca, el mitjà per a l'aire, la velocitat de la boca del mirall és generalment 0.05 ~ 0,95; lent d'oli amb oli de cedre com a mitjà, la taxa de boca del mirall pot ser propera a 1,5.
Longitud d'ona de la llum ordinària de 400~700nm, de manera que el valor de la potència de resolució del microscopi no serà inferior a 0,2 μm, el poder de resolució de l'ull humà és de 0,2 mm, de manera que el disseny general de l'ampliació del microscopi zui sol ser 1000X.
En segon lloc, microscopi d'exploració confocal làser
Microscopi d'exploració confocal làser (microscopi d'exploració confocal làser), amb un làser com a font de llum d'escaneig, punt per punt, línia per línia, superfície per superfície imatges d'escaneig ràpid, làser d'escaneig i col·lecció de fluorescència d'un objectiu comú, punt d'enfocament làser d'escaneig objectiu , però també imatge instantània del punt objecte. A causa de la longitud d'ona més curta del feix làser, el feix és molt fi, de manera que el microscopi d'escaneig làser confocal té una alta resolució, aproximadament 3 vegades la d'un microscopi òptic normal. El sistema es centra una vegada i l'exploració es limita a un pla de la mostra. Quan la profunditat d'enfocament no és la mateixa, es poden obtenir imatges de diferents nivells de profunditat de la mostra, i aquesta informació de la imatge s'emmagatzema a l'ordinador, mitjançant anàlisi i simulació per ordinador, pot mostrar l'estructura tridimensional de la mostra cel·lular .
