Biomicroscòpia pel que fa al volum de blocs de teixit
Microscòpia biològica Fins ara, la fixació en fred, la secció ultrafina congelada i la liofilització són mètodes habituals per a les microseccions de raigs X de teixits i cèl·lules. Els detalls d'aquest mètode s'expliquen de la següent manera:
Per als microscopis biològics amb un condensador, el condensador es pot moure cap amunt i cap avall per moderar la brillantor, i també es pot canviar l'obertura de la llum variable per aconseguir una brillantor moderada de 9b. Si la llum és assolellada, el condensador es pot elevar adequadament i l'obertura de la font de llum variable es pot augmentar adequadament. Si la llum és massa forta, la lent del condensador es pot baixar adequadament i l'obertura de la llum que es creua es pot reduir adequadament. Si encara us sentiu enlluernador en aquest cas, podeu triar un filtre adequat i col·locar-lo al suport sota el condensador. Aquest roure podrà obtenir la lluentor que et satisfà. Per descomptat, ajustar les posicions superior i inferior del condensador, ajustar la mida de l'obertura de la lectura òptica variable i seleccionar un filtre adequat requereix un cert període de pràctica per guanyar experiència.
Un tema molt important en microscòpia biològica és que en el procés de mostreig i separació de cèl·lules, després de la liofilització i la incrustació de resina (FD), després de la congelació d'àrids ultrafins i després de la liofilització, el contingut de 65 elements en cada part s'ha de manejar amb cura. Les cèl·lules a analitzar no es poden danyar. Perquè la microanàlisi de raigs X no només implica molts passos, sinó que també costa molt. Si les cèl·lules analitzades són cèl·lules danyades o cèl·lules mortes després d'un llarg temps i un processament de diversos passos, és molt lamentable treure conclusions equivocades. Per exemple, els cardiomiòcits separats pel tractament amb col·lagenasa tenen dues formes, una de vareta llarga
Biomicroscòpia La quantitat i la distribució d'electròlits en aquests dos tipus de cèl·lules són força diferents. Na és molt alt i K molt baix en cardiomiòcits circulars, i la concentració de ca en nematodes és molt alta. Després de comprovar amb altres mètodes d'anàlisi, es demostra que l'alt Na i el baix K de les cèl·lules rodones i l'alt Ca en els mitocondris es deuen al dany de la membrana cel·lular durant el procés de separació cel·lular. El mètode de fixació freda de cèl·lules i teixits sol adoptar primer l'extinció i la fixació, i després emmagatzemar-los en nitrogen líquid. La fixació d'extinció és molt important per a l'efecte de la conservació. Les cèl·lules vives o els teixits frescos són rics en aigua. A l'extinció, les parts de les cèl·lules o teixits que estan en contacte directe amb el refrigerant triturat (sobretot quan s'apaga amb nitrogen líquid) sovint es congelen i es fixen primer, formant així una "closca", que dificulta les parts centrals de les cèl·lules. triturada i fixada en fred. Per tant, quan es fa una anàlisi de microàrees en línia X, sovint es troba que hi ha cristalls de gel al centre de cèl·lules més grans. Per evitar que això passi, s'utilitza com a refrigerant trencat una substància amb un punt de fusió superior al del nitrogen líquid però inferior al del 806c. Hi ha moltes substàncies d'aquest tipus, però la més fàcil d'obtenir, la més barata és el propà concentrat (punt d'ebullició - 42.120c, punt de fusió - 187.10c, pes molecular 44.1) i la velocitat de refredament és la més ràpida. . Però el seu inconvenient és que és inflamable.
El microscopi biològic pot posar la fibra muscular en un bastidor especial, de manera que quan la contracció de la fibra muscular arribi a una fase determinada i s'hagi de solucionar, inicieu immediatament el broquet per ruixar propà líquid a la fibra muscular per apagar-la i arreglar-la. A continuació, es van treure les fibres musculars juntament amb el marc i es van posar en nitrogen líquid. Si es fixen cèl·lules sanguínies o cèl·lules aïllades, primer concentreu les cèl·lules per centrifugació a baixa velocitat, transferiu les cèl·lules a un vial de plata amb bona conductivitat tèrmica, col·loqueu el vial en propà líquid i congeleu-los per fixar-los. Quan es va fixar el pàncrees de rata al laboratori Hall, els dos blocs d'acer es van refredar prèviament amb heli líquid (o nitrogen líquid) i els dos blocs de coure es van subjectar amb pinces i es van col·locar a la part davantera i posterior del pàncrees per apagar i arreglar. el pàncrees. Els teixits o les cèl·lules es poden emmagatzemar en nitrogen líquid per a un emmagatzematge a llarg termini després de l'extinció i la fixació.
Microscòpia biològica A més del mètode de secció ultrafina congelada més respectat actualment, aquí hi ha una altra tècnica de deposició utilitzada pels científics. S'afegeix una substància per formar un sediment amb el component a analitzar per immobilitzar-lo abans de l'anàlisi, i després s'analitza el sediment. Per exemple, les persones sovint utilitzen oxalat i piroantimonat per dipositar ca a les cèl·lules musculars. El primer no és prou sensible a la baixa concentració de Ca al citoplasma; El piroantimonat és més sensible i pot formar dipòsits densos en electrons amb Ca lliure al cervell, però el piroantimonat no és compatible amb sodi, manganès, bari, ferro També es formen dipòsits i són menys específics. El procés de preparació d'exemplars és similar a la preparació d'exemplars de secció ultrafina de microscopi electrònic de transmissió ordinari, la diferència és que el 3% de piroantimonat de potassi (tampó fosfat salí, pH 7,6) es va fixar durant 6 hores abans de la fixació, i a les seccions ultrafines del múscul tenyit, Es van observar dipòsits negres a les línies mitjanes de les bandes A i 2 de cada sarcòmer, i es van utilitzar seccions sense tacar per a la microanàlisi de raigs X. El tetraclorhidrat de diaminobenzidina (DAB) es va utilitzar per precipitar substàncies que contenien hem, etc. La combinació de la reacció de precipitació histoquímica i el pont de microdiferenciació de raigs X es pot considerar en laboratoris que no tenen condicions de secció ultrafina congelada. El semiquantitatiu es pot fer segons l'alçada màxima dels elements a analitzar
