Els microscopis de fluorescència es classifiquen en dos tipus segons els seus camins òptics:
1. Microscopi de fluorescència de transmissió: la font de llum d'excitació s'utilitza per excitar la fluorescència passant a través del material de la mostra a través d'una lent de condensador. També es poden utilitzar concentradors de camp fosc d'ús habitual i els concentradors normals es poden utilitzar per ajustar el reflector per redirigir i lòbul lateral la llum d'excitació cap a la mostra. Aquest és un microscopi de fluorescència relativament antic-. El seu avantatge és una forta fluorescència amb un augment baix, però el seu desavantatge és que la seva fluorescència disminueix amb l'augment de l'augment. Per tant, és millor observar materials d'exemplars més grans.
2. El microscopi de fluorescència de llum caiguda és un nou tipus de microscopi de fluorescència desenvolupat en els temps moderns. A diferència de l'anterior, la llum d'excitació cau des de la lent de l'objectiu cap avall a la superfície de la mostra, utilitzant la mateixa lent objectiu que el condensador d'il·luminació i la lent objectiu per recollir la fluorescència. S'ha d'afegir un divisor de feix de color dual al camí òptic, que dista 45 graus de l'urani lleuger. Angle, la llum d'excitació es reflecteix a la lent de l'objectiu i es centra en la mostra. La fluorescència generada per la mostra, així com la llum d'excitació reflectida per la superfície de la lent de l'objectiu i el vidre de la coberta, entren a la lent de l'objectiu i tornen al divisor de feix de color dual, separant la llum d'excitació i la fluorescència. La llum d'excitació residual és llavors absorbida pel filtre de bloqueig. Si s'utilitzen diferents combinacions de filtres d'excitació/separadors de feix de color dual/filtres de bloqueig, poden satisfer les necessitats de diferents productes de reacció fluorescent. Els avantatges d'aquest microscopi de fluorescència són la il·luminació de camp uniforme, imatges clares i una fluorescència més forta amb un augment més gran.
(2) Instruccions d'ús del microscopi de fluorescència
1. Enceneu la font de llum. La làmpada de mercuri a ultra-alta pressió s'ha de preescalfar durant uns minuts per assolir la seva màxima brillantor.
2. La microscòpia de fluorescència de transmissió requereix la instal·lació del filtre d'excitació necessari entre la font de la làmpada i el condensador, i el filtre de bloqueig corresponent darrere de la lent de l'objectiu. El microscopi de fluorescència de llum caiguda ha d'inserir el filtre d'excitació necessari/separador de feix de color dual/bloc de filtre de bloqueig a la ranura del camí òptic.
3. Observeu amb un microscopi de baixa-potència i ajusteu el centre de la font de llum segons el dispositiu d'ajust dels diferents tipus de microscopis de fluorescència, de manera que quedi situat al centre de tot el punt d'il·luminació.
4. Col·loqueu l'exemplar i centreu-lo per a l'observació. S'ha de parar atenció durant l'ús: no observeu directament amb els ulls abans d'instal·lar el filtre per evitar danys oculars; Quan s'observen mostres amb un microscopi d'oli, s'ha d'utilitzar un microscopi especial d'oli no fluorescent; Un cop apagada la làmpada de mercuri d'alta pressió-, no es pot tornar a encendre immediatament. Es triga 5 minuts a reiniciar-se, en cas contrari serà inestable i afectarà la vida útil de la làmpada de mercuri.
(3) Observant sota un microscopi de fluorescència en una plataforma d'ensenyament mitjançant un filtre de llum blau violeta, es poden veure cèl·lules tacades amb un colorant fluorescent taronja d'acridina al 0,01%. El nucli i el citoplasma estan excitats per produir dos colors diferents de fluorescència (verd fosc i vermell taronja).
