Introducció als avantatges i desavantatges de la microscòpia de fluorescència per escaneig làser
Avantatges del microscopi d’escaneig làser multiphoton:
1. Entusiasmada per la llum vermella o infraroja, la dispersió de la llum és petita i la dispersió de partícules petites és inversament proporcional a la quarta potència de la longitud d’ona.
2. Es poden recollir fotons més dispersos de la secció d'imatge sense necessitat de forats.
3. Els forats no poden distingir fotons dispersos emesos de zones defocades o focals, i els multiphotons tenen una millor relació senyal-soroll en imatges profundes.
5. La llum ultraviolada o visible que s’utilitza per a l’excitació de fotons d’un sol fotó s’absorbeix fàcilment i s’atén per la mostra abans que el feix arribi al pla focal, cosa que dificulta la il·lusió de capes profundes.
5. En termes d’observació de microscòpia biològica, la primera consideració és no danyar l’estat actiu de l’organisme en si mateix, mantenir la circulació d’aigua, concentració d’ions, oxigen i nutrients. En el camp de l’observació de la llum, l’energia tèrmica i del fotó ha de romandre dins de la dosi d’irradiació i l’energia lleugera que no danyen les cèl·lules.
6. La microscòpia multiphoton té molts avantatges. En termes de resolució tridimensional, invasió de profunditat, eficiència de dispersió, llum de fons, relació senyal-soroll, control, etc., hi ha característiques que els microscopis làser anteriors no posseeixen o no poden superar
Desavantatges del microscopi d'escaneig làser multiphoton:
1. Només per a la imatge de fluorescència.
2. Si la mostra inclou cromòfors que poden absorbir llum d’excitació, la mostra pot ser sotmesa a danys tèrmics.
3. La resolució es redueix lleugerament, tot i que es pot millorar mitjançant la utilització simultàniament forats confocals, hi ha pèrdua de senyal.
4. A causa de les limitacions de làsers ultrafastos costosos, el cost dels microscopis d’escaneig multifotó és relativament elevat.
