Principi de funcionament del microscopi confocal làser
La microscòpia confocal làser es basa en imatges de microscopi de fluorescència amb l'addició d'un dispositiu d'escaneig làser, l'ús de processament d'imatges per ordinador, la resolució de la imatge òptica augmentada en un 30% - 40%, l'ús d'excitació de llum ultraviolada o visible de fluorescents sondes, per tal d'obtenir la imatge de fluorescència de la microestructura interna de cèl·lules o teixits, a nivell subcel·lular per observar senyals fisiològics i canvis de morfologia cel·lular, com ara Ca2+, PH, potencial de membrana, etc. una nova generació d'eines de recerca potents en morfologia, biologia molecular, neurociència, farmacologia, genètica i altres camps. El sistema d'imatge confocal làser és una nova generació potent d'eines de recerca en els camps de la morfologia, la biologia molecular, la neurociència, la farmacologia, la genètica, etc. El sistema d'imatge confocal làser es pot utilitzar per observar una varietat de teixits i cèl·lules tacats, no tacats i fluorescentment marcats, etc., per observar i estudiar el creixement i desenvolupament de seccions de teixit i cèl·lules in vivo, i per estudiar i mesurar intracel·lulars. transport de substàncies i conversió d'energia. És capaç de dur a terme l'estudi dels canvis d'ions i PH en cèl·lules vives (RATIO), investigació de neurotransmissors, tomografia d'interferència diferencial i fluorescència, tomografia de fluorescència múltiple i solapament, anàlisi d'espectroscòpia de fluorescència d'indicadors de fluorescència d'anàlisi quantitativa de mostres de fluorescència de temps- exploració retardada i components dinàmics de l'estructura dinàmica tridimensional de teixits i cèl·lules, anàlisi de la transferència d'energia de ressonància de fluorescència, investigació d'hibridació in situ de fluorescència (FISH), investigació del citoesquelet (FISH) i estudi del citoesquelet. FISH), investigació del citoesquelet, recerca de localització de gens, anàlisi de productes de PCR en temps real in situ, investigació de recuperació de blanqueig de fluorescència (FRAP), investigació de comunicació intercel·lular, investigació interproteïna, investigació sobre el potencial de membrana i la fluïdesa de la membrana, etc., per completar el anàlisi d'anàlisi d'imatges i reconstrucció tridimensional i altres anàlisis.
Àrees d'aplicació del sistema de microscopi confocal làser:
Implica la medicina, la investigació científica sobre animals i plantes, bioquímica, **ologia, biologia cel·lular, embrió de teixits, ciència dels aliments, genètica, farmacologia, fisiologia, òptica, patologia, botànica, neurociència, biologia marina, ciència dels materials, ciència electrònica, mecànica, petroli geologia, mineralogia.
Principis bàsics
El microscopi òptic tradicional utilitza una font de llum de camp, la imatge de cada punt de la mostra es veurà interferida per la difracció o dispersió de la llum dels punts veïns; el microscopi confocal làser utilitza un raig làser a través del forat il·luminador per formar una font de llum puntual per escanejar cada punt del pla focal de l'espècimen, el punt irradiat de l'exemplar s'imaginarà al forat de detecció i després serà rebut pel microscopi. forat de detecció després del tub multiplicador de punts (PMT) o del dispositiu d'electroacoblament en fred (cCCD), punt per punt o línia per línia, i després es mostrarà ràpidament al monitor de l'ordinador. Rebuda punt per punt o línia per línia pel PMT o cCCD darrere del forat de la sonda, la imatge fluorescent es forma ràpidament a la pantalla del monitor de l'ordinador. El forat d'il·luminació i el forat de detecció es conjuguen respecte al pla focal de la lent de l'objectiu, els punts del pla focal se centren al forat d'il·luminació i el forat d'emissió alhora, i els punts fora del pla focal no ho faran. s'imatge al forat de detecció, de manera que la imatge confocal obtinguda sigui una secció transversal òptica de l'exemplar, la qual cosa supera l'inconvenient de la difuminació de la imatge del microscopi normal.
