Per què l'augment de la lent d'oli és més gran que el de l'objectiu normal?
Raons per les quals cal arreglar els bacteris abans de la tinció en experiments microbiològics:
1: Mata les cèl·lules, és fàcil de tenyir amb colorant.
2: Feu que els bacteris s'adhereixin al portaobjectes de vidre i no és fàcil ser rentat per aigua.
Quan es fixa, s'ha d'assecar lentament. Si realment voleu accelerar, podeu assecar-lo unes quantes vegades a la distància per sobre de la flama de la làmpada d'alcohol. No deixeu que el vidre llisqui s'escalfi, en cas contrari, podria destruir la forma de vida dels bacteris.
Tinció de Gram i observació microscòpica de bacteris
1. Principi experimental
Principi de tinció de Gram: els bacteris responen de manera diferent a la tinció de Gram a causa de la composició i estructura de les seves parets cel·lulars. La paret cel·lular dels bacteris Gram-positius és principalment un nus de xarxa format per peptidoglicà. Quan es tracta amb etanol, la mida dels porus de l'estructura de la xarxa es fa més petita a causa de la deshidratació, i la permeabilitat disminueix, de manera que el complex de cristall violeta-iode La substància no és fàcil d'eluir i retenir a la cèl·lula, i el blau- El color porpra de l'agent de tinció primari encara es manté després de la decoloració i la contratinció. La capa de peptidoglicà de la paret cel·lular dels bacteris Gram-negatius és prima i el contingut de lípids és alt, de manera que quan es realitza el tractament de decoloració, el lípid es dissol amb etanol (o acetona) i la permeabilitat de la paret cel·lular augmenta, de manera que que el complex de cristall violeta-iode És més fàcil d'eluir, i després de la contratinció amb una contrataca, les cèl·lules es tenyeixen amb el color vermell de la contrataca. Principi d'imatge del microscopi: els microscopis òptics ordinaris moderns utilitzen dos sistemes de lents d'ocular i lent objectiu per augmentar la imatge, de manera que sovint s'anomenen microscopis compostos. En el sistema òptic del microscopi, el rendiment de la lent objectiu és el més crític i l'augment de la lent d'oli és el més gran, que és el més important per a la investigació microbiològica. L'objectiu principal d'afegir oli d'immersió entre el portaobjectes de vidre i la lent és augmentar la brillantor de la il·luminació i augmentar la resolució del microscopi. L'oli s'utilitza en comptes de l'aire com a mitjà de transmissió de la llum per reduir la refracció o la reflexió total de la llum i fer que la imatge observada sigui més clara.
2. Equips experimentals
1. Colònies:
Cultiu inclinat d'agar nutritiu Escherichia coli 24h,
Staphylococcus aureus cultiu inclinat d'agar nutrient durant unes 24 hores, cultiu inclinat d'agar nutrient de Bacillus subtilis 12-18h.
2. Solucions o reactius:
Aigua destil·lada, solució de iode, solució de tinció de cristall violeta, alcohol al 95 per cent, solució de tinció de safranina, oli de cedre. 3. Instrument:
Microscopi, portaobjectes de vidre, bucle d'inoculació, làmpada d'alcohol, pinces, teixit de lent.
3. Passos experimentals
a:
1. Unta
Traieu el portaobjectes, enceneu el portaobjectes, cremeu l'alcohol del portaobjectes i esterilitzeu-lo, poseu una petita gota d'aigua destil·lada al mig, utilitzeu el bucle d'inoculació per recollir suaument una petita quantitat de bacteris al medi inclinat de la prova. tub, durant tot el procés, la boca del tub d'assaig ha d'estar per sobre de la làmpada d'alcohol i la velocitat ha de ser ràpida per evitar la contaminació del medi de cultiu. A continuació, unta les petites gotes d'aigua del portaobjectes de vidre amb un moviment circular, atureu-vos quan les gotes d'aigua estiguin ennuvolades i espereu que s'assequin i es fixin.
2. Tintura primària
Deixeu caure cristall violeta (és adequat només cobrir la pel·lícula bacteriana) a la colònia, taqueu durant 1-2 minuts, aboqueu la solució de tinció i esbandiu amb aigua fina des de la part superior del portaobjectes fins que l'eluat sigui incolor. i col·loqueu la taca sobre el portaobjectes. Sacsejar l'aigua de les rodanxes.
3. Mordant
Afegiu la solució de iode gota a gota per eliminar l'aigua residual, tapeu-ho durant aproximadament 1 minut i renteu-lo amb aigua.
4. Decoloració
Agiteu l'aigua del portaobjectes de vidre, inclineu el portaobjectes de vidre i afegiu-hi un 95 per cent d'alcohol per decolorar-lo sota el fons blanc, fins que l'alcohol que surt no sembli blau, esbandiu immediatament l'alcohol amb aigua i col·loqueu el portaobjectes de vidre. treure l'aigua a les rodanxes.
5. Contratenció
Tingueu de contrast amb solució de safranina durant uns 1-2 minuts, renteu-lo amb aigua i, a continuació, assequeu-lo amb paper absorbent.
6. Examen microscòpic:
Busqueu la colònia bacteriana que s'observa sota la lent de baix augment (seguiu movent la diapositiva, si sentiu una ombra vermella, atureu-vos immediatament, ajusteu l'ampliació, si no és una colònia, continueu trobant), aixequeu el canó de la lent, i després canvieu al mirall d'oli. Afegiu una gota d'oli de cedre a la zona de mostra i baixeu amb cura el canó de la lent amb l'ajustador gruixut de manera que la lent d'oli quedi submergida a l'oli i gairebé toqui la mostra. Aixequeu el condensador a la posició més alta i obriu completament l'obertura, utilitzeu l'ajustador gruixut per aixecar el canó de la lent lentament fins que la imatge de l'objecte aparegui al camp de visió i utilitzeu l'ajustador fi per deixar-lo clar i enfocat.
