Quins són els avantatges de la microscòpia làser confocal
En comparació amb els microscopis tradicionals de camp ampli, la microscòpia confocal d'escaneig làser té les característiques d'alta definició, alta resolució i alta sensibilitat. S'utilitza àmpliament en el camp de la biomedicina i s'ha convertit en una important eina d'imatge en aquest camp. Per què confocal pot obtenir tant d'amor, i quins avantatges té? Aquest article enumera tres aspectes per discutir els avantatges de confocal.
Recolliu només el senyal al pla focal, fent que la imatge sigui clara de la borrosa
Llavors, com aconsegueix aquest avantatge la microscòpia confocal? Això es deu al maquinari confocal clau: el forat, tal com es mostra a la figura 2. És un petit forat davant del detector i col·locat al pla òptic conjugat al pla focal de la mostra. Quan la llum d'excitació irradia la mostra, tant el pla focal com el pla no focal de l'àrea de la mostra s'excitaran per generar senyals de fluorescència, ajusteu la mida adequada del forat (generalment 1 Au), de manera que el senyal de fluorescència al pla focal (línia de punts verds) poden ser senyals fluorescents (línies discontínues vermelles i blaves) que passen pel forat per arribar al detector fora del pla focal no poden arribar al detector a través del forat. Mitjançant l'addició de forats de maquinari, el confocal pot obtenir imatges clares i d'alta qualitat sense canviar el mètode de fabricació de microscopis de fluorescència normals.
A causa de l'existència del forat, només podem adquirir el senyal en el pla focal i obtenir una imatge bidimensional d'alta resolució. Ajustant contínuament la posició de l'eix Z, es poden obtenir imatges bidimensionals a diferents posicions de l'eix Z i es poden obtenir una sèrie d'imatges contínues de "talls òptics". Després d'obtenir aquestes rodanxes òptiques, el mòdul 3D equipat amb el programari de l'instrument es pot utilitzar per reconstruir la imatge 3D per construir una imatge 3D clara. Aquesta col·lecció contínua i no destructiva d'imatges de tall òptics realitza la funció de "TC cel·lular".
La precisió dels resultats de la colocalització està estretament relacionada amb la resolució de la imatge, per la qual cosa hem de triar un mètode d'imatge de major resolució quan realitzem experiments de colocalització. En comparació amb els microscopis tradicionals, la microscòpia confocal s'ha convertit en una potent eina per a la investigació de colocalització a causa dels seus avantatges d'alta resolució.
A causa de l'existència del límit de difracció, la resolució òptica confocal convencional és d'uns 200 nm. Quan necessitem observar estructures de més de 200 nm, confocal pot determinar amb precisió el grau de colocalització. Si es requereix una anàlisi de colocalització, es pot seleccionar el mòdul d'anàlisi de colocalització equipat amb el programari confocal.
