Utilització de la microscòpia de fluorescència: tècniques i habilitats
Paràmetres tècnics del microscopi de fluorescència 1. Ocular gran angular 2. Objectiu acromàtic 3. Convertidor de lents d'objectiu de quatre forats 4. Dispositiu epifluorescent Blau (B) Verd (G) Sistema d'excitació 10Làmpada de mercuri de 0W 5. Mecanisme d'ajust de l'enfocament gruixut i fi coaxial: ajust Interval d'enfocament: 15 mm Valor de la graella de micromoviment: 0,002 mm 6. Taula mecànica de doble capa Interval de moviment longitudinal: 70 mm Interval de moviment lateral: 50 mm
Utilitzeu el mètode de l'habilitat
(1) Porta de vidre
El gruix de la diapositiva de vidre ha d'estar entre 0,8 i 1,2 mm. Una diapositiva massa gruixuda absorbirà més llum d'una banda i, d'altra banda, la llum d'excitació no es pot concentrar a la mostra. Les diapositives han de ser llises, de gruix uniforme i lliures d'autofluorescència evident. De vegades s'utilitzen làmines de vidre de quars.
(2) Vidre cobert
El gruix de la coberta de vidre és d'aproximadament 0,17 mm, llisa. Per reforçar la llum d'excitació, també es pot utilitzar un vidre de coberta d'interferència, que és un vidre de coberta especial recobert amb diverses capes de substàncies (com ara fluorur de magnesi) que tenen diferents efectes d'interferència sobre la llum de diferents longituds d'ona, que poden fer que el la fluorescència va sense problemes. La llum excitant es fa passar i es reflecteix, i aquesta llum d'excitació reflectida excita l'exemplar.
(3) Exemplar
Les rodanxes de teixit o altres exemplars no han de ser massa gruixudes. Si és massa gruixut, la major part de la llum d'excitació es consumirà a la part inferior de l'exemplar, mentre que la part superior observada directament per la lent de l'objectiu no s'excitarà del tot. A més, la superposició de cèl·lules o la coberta d'impureses, afecten el judici.
(4) Agent de muntatge
La glicerina s'utilitza habitualment com a agent de muntatge, que no ha de tenir autofluorescència, incolora i transparent, i la brillantor de la fluorescència és més brillant a pH 8.5-9,5, i no és fàcil esvair ràpidament. Per tant, com a agent de muntatge s'utilitza habitualment una barreja igual de glicerol i una solució tampó de carbonat de 0,5 mol/l amb un pH de 9,0 a 9,5.
(5) oli de mirall
En general, quan s'observen mostres amb microscopis de fluorescència de camp fosc i lents d'immersió en oli, s'ha d'utilitzar oli d'immersió. El millor és utilitzar oli especial d'immersió no fluorescent. També es pot utilitzar la glicerina anterior i també es pot utilitzar parafina líquida, però l'índex de refracció és baix, la qual cosa té un lleuger impacte en la qualitat de la imatge. Influència.
