L'estructura especial d'un microscopi de fluorescència inclou:
(I) Sistema de filtre de color
El filtre de color és una part important del microscopi de fluorescència, els seus components bàsics mitjançant el filtre de llum d'excitació (primer filtre de barrera), el filtre de llum d'emissió (segon filtre de barrera) i la composició mig transparent i mig antifiltre (mirall que divideix el feix). . Diversos fabricants de models de filtre de color, el nom sovint no és uniforme.
1. Filtre de llum d'excitació i filtre de llum d'emissió: segons la font de llum i les característiques del fluorocrom, normalment escolliu els tres tipus de concordança següents, per proporcionar un cert rang de longituds d'ona de la llum d'excitació i fer que l'excitació de la mostra de fluorescència a través l'ocular a la imatge.
Excitació UV: el filtre de llum d'excitació permet la transmissió de la llum UV i bloqueja el pas de la llum visible per sobre de 400 nm. El filtre d'emissió corresponent permet el pas de la llum blava, que apareix blava en el camp de visió, per exemple, per a la tinció DAPI.
Excitació de llum blava: el filtre de llum d'excitació permet que la llum blava passi, bloquejant altres longituds d'ona de llum. El filtre d'emissió corresponent permet el pas de la llum verda, per exemple, per als marcadors de tinció de GFP.
Excitació verda: el filtre d'excitació permet que la llum verda passi, bloquejant altres longituds d'ona. El filtre d'emissió corresponent acostuma a deixar passar la llum vermella, per exemple, la tinció de rodamina.
2. Filtre mig transparent i mig reflectant: la seva funció és bloquejar completament l'excitació de la llum a través de la reflexió; i a través del rang de longitud d'ona corresponent de la llum emesa. El seu model i l'excitació de filtres de llum i emissió de filtres de llum corresponen.
(B) Objectiu i ocular
Es poden aplicar una varietat de lents d'objectiu, però * una bona elecció de lents d'objectiu simètrics i acromàtics, a causa de la seva autofluorescència és molt petita i les propietats de transmissió de la llum (rang de longitud d'ona) adequades per a la fluorescència. Com que la brillantor de fluorescència de la imatge en el camp de visió del microscopi és proporcional al quadrat de la velocitat de boca de l'objectiu i inversament proporcional a la seva ampliació, per tal de millorar la brillantor de la imatge de fluorescència, l'objectiu amb una velocitat de boca gran hauria de ser utilitzat. Especialment per a la fluorescència, els exemplars no són prou forts, s'han d'utilitzar una gran velocitat bucal, objectiu de transmissió de llum alta, amb el mínim possible amb l'ocular.
(C) altres dispositius òptics
Reflector, la seva capa reflectant és generalment xapada en alumini, perquè l'alumini a l'ultraviolat i l'absorció de llum visible de la regió blau-violada és menor, reflectint fins a un 90% o més (mentre que la reflectivitat de la plata és només del 70%). Generalment s'utilitzen reflectors plans. Mirall reflector, dissenyat i fabricat específicament per a microscòpia de fluorescència mirall focus de vidre de quars o un altre vidre transparent UV. Dispositiu de llum caiguda, que a més de la funció de font de llum transmesa, és més adequat per a mostres opacs i translúcids, com ara pel·lícula gruixuda, membrana de filtre, colònia, cultiu de teixits i altres mostres per a l'observació directa. En els últims anys, s'ha desenvolupat un nou tipus de microscopi de fluorescència que utilitza un dispositiu de llum caiguda, anomenat microscopi de fluorescència caiguda.
(D) font de llum
Actualment, s'utilitza com a font de llum una làmpada de mercuri d'alta pressió de 50 o 100 W. El treball dels dos elèctrodes de descàrrega, causat per l'evaporació del mercuri, la bola de pressió de l'aire augmenta ràpidament (aquest procés generalment triga uns 5 ~ 15 minuts), i en el procés d'emissió de quants de llum, la longitud d'ona de la llum alliberada és suficient per excitar tot tipus de substàncies fluorescents, per tant, per a la microscòpia de fluorescència s'utilitza habitualment.
Les làmpades de mercuri tenen una vida útil relativament curta, generalment 200 hores, i en resposta a aquesta limitació de vida útil, en els darrers anys, una nova font de llum fluorescent, X-Cite, s'ha utilitzat àmpliament per la seva llarga vida útil de la làmpada de 2000 hores i el seu ús flexible. - No cal preescalfament i està llest per utilitzar-lo des de la caixa.
