El paper de cada filtre en la microscòpia de fluorescència
El problema més crucial amb la microscòpia de fluorescència és la combinació de filtres, i tant el filtre d'excitació com el filtre de blindatge han de ser adequats per al cos fluorescent observat i coincidir entre si. Per a determinades finalitats específiques, si hi ha un error en seleccionar un filtre, pot provocar malentesos i fins i tot resultats incorrectes. Els assoliments de la tecnologia de microscòpia de fluorescència i l'ús de filtres d'alta qualitat i grups de filtres enginyosos són inseparables. Hi ha diversos tipus de filtres per a la microscòpia de fluorescència.
1. Filtre absorbent de calor
El filtre absorbent de calor és un filtre necessari per evitar que la radiació tèrmica de l'espectre de la font de llum danyi el grup de dispositius òptics. Els primers microscopis avançats estaven equipats amb ampolles en forma de tambor que podien contenir aigua destil·lada com a dispositius absorbents de calor. Els microscopis de recerca moderns a gran escala estan equipats amb filtres de vidre absorbents de calor en caixes o cambres de llum de font de llum, que són làmines de vidre transparents lleugerament grogues. Els filtres KG1 (2 mm) i BG38 (4 mm) de Leitz poden transmetre gairebé tots els espectres de llum ultraviolada i visible, convertint-los en filtres amb un flux de llum de fins al 98%. Només absorbeix selectivament les línies de radiació fototèrmica infraroja.
2. Filtre d'excitació
Els filtres d'excitació poden absorbir selectivament línies espectrals de longitud d'ona llarga i només transmeten llum ultraviolada. Els filtres per a la llum morada, blava i verda són filtres d'excitació. Zeiss, Reichert, Olympus B-series, G-series, BG series, Shott UG series, Opton H, G, BP series, Leitz BP series i altres filtres són filtres d'excitació.
3. Filtre de bloqueig
El filtre de bloqueig és un filtre que absorbeix selectivament les línies espectrals de longitud d'ona curta i la radiació infraroja, permetent a l'observador veure la fluorescència emesa per l'objecte que s'està provant alhora que protegeix la còrnia dels danys UV.
4. Filtre de separació de llum de color
El filtre de separació de llum de color és un filtre que reflecteix la llum d'excitació sobre l'objecte que s'està provant, fent que l'objecte emeti fluorescència i després transmet la fluorescència a l'ocular. Aquest tipus de filtre només es pot utilitzar en concentradors de feix descendent, mentre que la microscòpia de fluorescència de llum de transmissió no requereix separació de colors.
5. Filtre d'interferències
El filtre d'interferència és un tipus de filtre d'excitació d'alt rendiment. És un filtre fet apilant diverses pel·lícules metàl·liques fines entre dues làmines de vidre polides. L'índex de refracció de cada pel·lícula metàl·lica fina és diferent, de manera que les línies espectrals de diferents longituds d'ona de la font de llum d'il·luminació es reflecteixen repetidament a cada pel·lícula metàl·lica, provocant que algunes longituds d'ona de les línies espectrals s'anul·lin a causa d'una interferència destructiva, mentre que altres s'enforteixen per interferència additiva i transmesa a través. Això dóna com a resultat un filtre amb un espectre de transmissió estret, una amplada de mig pic de només 6 ~ 20 nm i una transmitància del 60% ~ 70%.
