La finalitat, els atributs i l'ús d'un microscopi de fluorescència
El principi i les característiques estructurals del microscopi de fluorescència: el microscopi de fluorescència utilitza una font de llum puntual amb alta eficiència lluminosa per emetre una certa longitud d'ona de llum (com ara llum ultraviolada de 3650 polzades o llum blava porpra de 4200 polzades) a través del sistema de filtre com a excitació. llum per estimular la fluorescència de la mostra. Després que la substància emeti fluorescència de diversos colors, s'observa mitjançant l'ampliació de la lent de l'objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, sota un fons de fort contrast, encara que la fluorescència sigui molt feble, és fàcil d'identificar i té una alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a la investigació de l'estructura i la funció cel·lular i la composició química. L'estructura bàsica d'un microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic ordinari més alguns accessoris (com ara una font de llum fluorescent, un filtre d'excitació, un divisor de feix de dos colors i un filtre de bloqueig, etc.). Font de llum fluorescent: generalment s'utilitza làmpada de mercuri d'alta pressió (50-200W), que pot emetre llum de diverses longituds d'ona, però cada substància fluorescent té una longitud d'ona d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que un filtre d'excitació (En general, hi ha filtres d'excitació ultraviolat, morat, blau i verd), que només permeten que la llum d'excitació d'una determinada longitud d'ona passi i irradii l'exemplar, alhora que absorbeix una altra llum. Després que cada substància sigui irradiada per llum d'excitació, emet fluorescència visible amb una longitud d'ona més gran que la longitud d'ona d'irradiació en molt poc temps. La fluorescència és específica i generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar una fluorescència específica, es requereix un filtre de bloqueig (o supressió) darrere de la lent de l'objectiu.
Té dues funcions: una és absorbir i bloquejar l'entrada de llum d'excitació a l'ocular, per no pertorbar la fluorescència i danyar els ulls; l'altre és seleccionar i deixar passar la fluorescència específica, mostrant un color fluorescent específic. Els dos filtres s'han d'utilitzar junts.
Hi ha dos tipus de microscopis de fluorescència pel que fa als seus camins òptics:
1. Microscopi de fluorescència de transmissió: la font de llum d'excitació es fa passar a través del material de la mostra a través d'una lent de condensador per excitar la fluorescència. S'utilitza habitualment un col·lector de camp fosc i també es pot utilitzar un col·lector ordinari per ajustar el mirall de manera que la llum d'excitació es redirigeixi i es passi cap a la mostra. Aquest és un microscopi fluorescent antic. L'avantatge és que la fluorescència és forta amb un augment baix, però el desavantatge és que la fluorescència disminueix amb l'augment de la magnificació. Per tant, és millor observar materials de mostra més grans.
2. El microscopi epifluorescència és un nou tipus de microscopi de fluorescència desenvolupat en els temps moderns. La diferència és que la llum d'excitació cau des de la lent de l'objectiu fins a la superfície de la mostra, és a dir, s'utilitza la mateixa lent objectiu com a condensador d'il·luminació i la lent objectiu per recollir la fluorescència. Cal afegir un divisor de feix dicroic al camí de la llum, que es troba a 45 graus de distància de l'urani lleuger. La llum d'excitació es reflecteix a la lent de l'objectiu i es recull a la mostra. La fluorescència generada per la mostra i la llum d'excitació reflectida per la superfície de la lent de la lent de l'objectiu i la superfície del vidre de la coberta entren a la lent de l'objectiu alhora i tornen al divisor de feix de dos colors per separar la llum d'excitació de la fluorescència. , la llum d'excitació residual s'absorbeix mitjançant filtres de bloqueig. Com canviar a una combinació de diferents filtres d'excitació / divisor de feix de dos colors / filtre de bloqueig, pot satisfer les necessitats de diferents productes de reacció fluorescent. L'avantatge d'aquest tipus de microscopi de fluorescència és que la il·luminació del camp de visió és uniforme, la imatge és clara i com més gran sigui l'augment, més forta serà la fluorescència.
(2) Com utilitzar el microscopi de fluorescència.
1. Enceneu la font de llum i la làmpada de mercuri d'alta pressió s'ha d'escalfar durant uns minuts per arribar al punt més brillant.
2. El microscopi de fluorescència de transmissió ha d'instal·lar el filtre d'excitació necessari entre la font de llum i el condensador, i instal·lar el filtre de bloqueig corresponent darrere de la lent de l'objectiu. Els microscopis d'epifluorescència han d'inserir el filtre d'excitació requerit/divisor de feix de doble color/insercions de filtre de bloqueig a les ranures del camí òptic.
3. Observeu amb una lent de baix augment, i ajusteu el centre de la font de llum de manera que quedi al centre de tot el punt d'il·luminació segons el dispositiu d'ajust dels diferents models de microscopis de fluorescència.
4. Col·loqueu la peça de mostra i observeu després d'enfocar. S'ha de parar atenció durant l'ús: no observar directament amb el filtre final, per no causar danys als ulls; quan observeu exemplars amb una lent d'oli, heu d'utilitzar una lent d'oli especial sense fluorescència; després d'apagar la làmpada de mercuri d'alta pressió, no es pot tornar a encendre immediatament, cal provar-la. Es pot reiniciar després de 5 minuts, en cas contrari serà inestable i afectarà la vida útil de la làmpada de mercuri.
(3) Observació Utilitzant un filtre de llum blava-violada sota un microscopi fluorescent a la plataforma d'ensenyament, es pot veure que el o. El 01 per cent de les cèl·lules tenyides amb colorant fluorescent taronja d'acridina, el nucli i el citoplasma estan excitats per produir dos colors diferents de fluorescència (verd fosc i vermell taronja).
