Els principis de la microscòpia de fluorescència i la microscòpia confocal làser
microscopi de fluorescència
1. Un microscopi de fluorescència és un dispositiu que utilitza llum ultraviolada com a font de llum per il·luminar l'objecte que s'està provant, fent que emeti fluorescència, i després observar la forma i la ubicació de l'objecte sota el microscopi. La microscòpia de fluorescència s'utilitza per estudiar l'absorció, el transport, la distribució i la localització de substàncies intracel·lulars. Algunes substàncies de les cèl·lules, com la clorofil·la, poden emetre fluorescència després d'estar exposades a la radiació ultraviolada; Tot i que algunes substàncies no poden emetre fluorescència, també poden emetre fluorescència després de ser tenyides amb colorants fluorescents o anticossos fluorescents i irradiades amb llum ultraviolada. La microscòpia de fluorescència és una de les eines per a la investigació qualitativa i quantitativa d'aquestes substàncies.
2. Principi del microscopi de fluorescència:
(A) Font de llum: la font de llum emet llum de diferents longituds d'ona (des de l'ultraviolat fins a l'infraroig).
(B) Font de llum del filtre d'excitació: transmet llum d'una longitud d'ona específica que pot produir fluorescència a l'espècimen, alhora que bloqueja la llum que no serveix per a la fluorescència d'excitació.
(C) Espècimen fluorescent: generalment tenyit amb pigment fluorescent.
(D) Filtre de bloqueig: transmet selectivament la fluorescència bloquejant l'excitació que no ha estat absorbida per la mostra, i algunes longituds d'ona també es transmeten selectivament en fluorescència. Un microscopi que utilitza la llum ultraviolada com a font de llum per emetre fluorescència d'objectes irradiats. El microscopi electrònic va ser muntat per primera vegada per Knorr i Harroska a Berlín, Alemanya, l'any 1931. Aquest tipus de microscopi utilitza feixos d'electrons d'alta velocitat en lloc de raigs de llum. A causa de la longitud d'ona molt més curta del flux d'electrons en comparació amb les ones de llum, l'ampliació del microscopi electrònic pot arribar a 800000 vegades, amb un límit de resolució mínim de 0,2 nanòmetres. El microscopi electrònic d'escaneig, que va començar a utilitzar-lo l'any 1963, permet a la gent veure les petites estructures a la superfície dels objectes.
3. Àmbit d'aplicació: S'utilitza per ampliar imatges d'objectes petits. S'utilitza generalment per a l'observació de biologia, medicina, partícules microscòpiques, etc.
microscopi confocal
1. Un microscopi confocal afegeix una lent semi-reflexiva a la trajectòria de la llum reflectida, que doblega la llum reflectida que ja ha passat per la lent cap a altres direccions. Hi ha un deflector amb un forat al seu punt focal i el petit forat es troba al punt focal. Darrere del deflector hi ha un tub fotomultiplicador. Es pot imaginar que la llum reflectida abans i després del punt focal de la llum de detecció no es pot enfocar al petit forat a través d'aquest sistema confocal, i serà bloquejada pel deflector. Així, el que mesura el fotòmetre és la intensitat de la llum reflectida al punt focal.
2. Principi: els microscopis òptics tradicionals utilitzen una font de llum de camp, i la imatge de cada punt de l'exemplar es veu afectada per la difracció o la llum dispersa des de punts adjacents; El microscopi confocal d'escaneig làser utilitza una font de llum puntual formada per un raig làser que passa per un forat il·luminat per escanejar tots els punts del pla focal de la mostra. El punt il·luminat de la mostra s'imatge al forat de la sonda i es rep punt per punt o línia pel tub fotomultiplicador (PMT) o el dispositiu d'acoblament termoelèctric (cCCD) després del forat de la sonda, formant ràpidament una imatge fluorescent a la pantalla del monitor de l'ordinador. . El forat d'il·luminació i el forat de detecció es conjuguen en relació amb el pla focal de la lent de l'objectiu. Els punts del pla focal es centren simultàniament en el forat d'il·luminació i el forat d'emissió, i els punts fora del pla focal no s'imatgen al forat de detecció. Això dóna com a resultat una imatge confocal que és la secció transversal òptica de l'exemplar, superant l'inconvenient de la difuminació de les imatges generals del microscopi.
3. Camps d'aplicació: medicina, investigació animal i vegetal, bioquímica, bacteriologia, biologia cel·lular, embriologia de teixits, ciència dels aliments, genètica, farmacologia, fisiologia, òptica, patologia, botànica, neurociència, biologia marina, ciència dels materials, ciència electrònica, mecànica , geologia del petroli i mineralogia.
