Fonaments i elements estructurals d'un microscopi de fluorescència
La microscòpia de fluorescència utilitza un punt d'alta eficiència lluminosa per emetre llum d'una certa longitud d'ona (com ara llum ultraviolada de 3650 polzades o llum blava porpra de 4200 polzades) a través del sistema de filtre com a llum d'excitació per excitar les substàncies fluorescents de la mostra per emetre fluorescència de diversos colors Després d'això, observeu a través de l'ampliació de la lent de l'objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, sota un fons de fort contrast, encara que la fluorescència sigui molt feble, és fàcil d'identificar i té una alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a la investigació de l'estructura i la funció cel·lular i la composició química. L'estructura bàsica d'un microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic ordinari més alguns accessoris (com ara una font de llum fluorescent, un filtre d'excitació, un divisor de feix de dos colors i un filtre de bloqueig, etc.). Font de llum fluorescent: generalment s'utilitza làmpada de mercuri d'alta pressió (50-200W), que pot emetre llum de diverses longituds d'ona, però cada substància fluorescent té una longitud d'ona d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que un filtre d'excitació (En general, hi ha filtres d'excitació ultraviolat, morat, blau i verd), que només permeten que la llum d'excitació d'una determinada longitud d'ona passi i irradii l'exemplar, alhora que absorbeix una altra llum. Després que cada substància sigui irradiada per llum d'excitació, emet fluorescència visible amb una longitud d'ona més gran que la longitud d'ona d'irradiació en molt poc temps. La fluorescència és específica i generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar una fluorescència específica, s'ha d'afegir un bloqueig (o supressió) darrere de la lent de l'objectiu i utilitzar-lo conjuntament.
La diferència entre el microscopi de fluorescència i el microscopi normal
1. El mètode d'il·luminació sol ser episcòpic, és a dir, la font de llum es projecta sobre la mostra a través de la lent de l'objectiu;
2. La font de llum és llum ultraviolada, la longitud d'ona és més curta i la resolució és més alta que la dels microscopis normals;
3. Hi ha dos filtres especials, el de davant de la font de llum s'utilitza per filtrar la llum visible, i el que hi ha entre l'ocular i la lent de l'objectiu s'utilitza per filtrar els raigs ultraviolats per protegir l'ull humà.
El microscopi de fluorescència també és una mena de microscopi òptic, la diferència principal és que la longitud d'ona d'excitació dels dos és diferent. Això determina la diferència entre el microscopi de fluorescència i el microscopi òptic ordinari en termes d'estructura i ús.
La microscòpia de fluorescència és una eina essencial en la citoquímica immunofluorescent. Es compon de components principals com la font de llum, el sistema de plaques de filtre i el sistema òptic. Es tracta d'utilitzar una certa longitud d'ona de llum per excitar l'exemplar per emetre fluorescència i observar la imatge de fluorescència de la mostra amplificant la lent objectiu i el sistema d'oculars.
