Ús i precaucions del microscopi de fluorescència estèreo
Instruccions:
(1) Col·loqueu el full de material a l'escenari.
(2) Enceneu l'estabilitzador de tensió del microscopi fluorescent. A continuació, premeu el grup d'inici per encendre la làmpada UV i no l'apagueu en un termini de 15 minuts, i no la torneu a engegar en un termini de 3 minuts després d'apagar-la.
(3) Gireu el filtre d'excitació a v, el filtre de separació de colors a v i seleccioneu un filtre de bloqueig de 495 o 475 nm.
(4) Trieu el microscopi d'objectiu fluorescent uvFL40, uvFL100 per a l'examen microscòpic.
(5) Afegiu oli no fluorescent a la diapositiva, primer feu servir 40 x i després utilitzeu un microscopi d'enfocament de 100 x per comprovar-ho. Apareix la fluorescència.
(7) Atès que la fluorescència de les substàncies fluorescents es debilita gradualment amb el temps quan són irradiades per llum ultraviolada, el camp de visió s'ha de canviar amb freqüència durant l'examen microscòpic.
(8) Els microscopis de baix augment uvFL10 o uvFL20 també es poden utilitzar per inspeccionar materials (no s'afegeix oli fluorescent quan s'utilitzen lents de baixa potència).
Mètode d'enregistrament de la imatge de fluorescència:
La imatge de fluorescència vista pel microscopi de fluorescència té característiques morfològiques i color i brillantor de fluorescència. A l'hora de jutjar els resultats, els dos s'han de combinar per a un judici global. Els resultats es registren a partir d'indicadors subjectius, és a dir, l'observació visual dels treballadors. Com a observació qualitativa general, bàsicament fiable. Amb el desenvolupament de la tecnologia i la ciència, s'utilitzen indicadors objectius per registrar els resultats del judici en diferents graus, com ara espectrofotòmetres cel·lulars, analitzadors d'imatges i altres instruments. Tanmateix, els resultats registrats per aquests instruments també s'han de combinar amb judicis subjectius.
La fotografia amb microscopi de fluorescència és molt necessària per enregistrar imatges de fluorescència. Com que la fluorescència és fàcil d'esvair i debilitar, és necessari registrar els resultats en temps real. El mètode és bàsicament el mateix que el de la fotomicrografia ordinària. Només cal utilitzar pel·lícules fotosensibles d'alta velocitat com ara ASA200 o superior o 24. superior. Com que la llum ultraviolada té un fort efecte en l'extinció de la fluorescència, com ara els marcadors FITC, la brillantor de la fluorescència disminuirà un 50 per cent quan s'irradia amb llum ultraviolada durant 30 segons. Per tant, si la velocitat d'exposició és massa lenta, no es pot fer la imatge fluorescent. Els microscopis de fluorescència d'investigació general tenen dispositius de sistema de fotomicrografia semiautomàtics o totalment automàtics.
Precaucions:
(1) Funcioneu estrictament d'acord amb els requisits de les instruccions de fàbrica del microscopi de fluorescència i no canvieu el programa a voluntat.
(2) La inspecció s'ha de dur a terme en una habitació fosca. Després d'entrar a la cambra fosca, connecteu la font d'alimentació i enceneu la làmpada de mercuri d'ultra alta pressió durant 5-15 minuts. Després que la llum forta de la font de llum sigui estable, els ulls s'adapten completament a la cambra fosca i comencen a observar l'exemplar.
(3) Per evitar que els raigs ultraviolats danyin els ulls, s'han de fer servir ulleres protectores quan s'ajusti la font de llum.
(4) El temps d'inspecció és preferiblement de 1-2 hores cada vegada. Si supera els 90 minuts, la intensitat lluminosa de la làmpada de mercuri d'ultra alta pressió disminuirà gradualment i la fluorescència es debilitarà; després d'irradiar l'exemplar amb raigs ultraviolats durant 3-5 minuts, la fluorescència també es debilitarà significativament; per tant, no hauria de superar les 2-2 hores com a màxim. 3h.
(5) La vida útil de la font de llum del microscopi de fluorescència és limitada i els exemplars s'han d'inspeccionar col·lectivament per estalviar temps i protegir la font de llum. Quan fa calor, s'han d'afegir ventiladors per dissipar la calor i les bombetes noves s'han d'enregistrar des del començament del seu temps d'ús. Quan la vulgueu tornar a utilitzar després d'apagar la làmpada, heu d'esperar fins que la bombeta es refredi prou abans d'encendre-la. Eviteu encendre la font de llum diverses vegades al dia.
(6) Observeu la mostra immediatament després de la tinció, ja que la fluorescència es debilitarà gradualment amb el temps. Si l'exemplar s'emmagatzema en una bossa de plàstic de polietilè a 4 graus, el temps de debilitament de la fluorescència es pot retardar i es pot evitar que l'agent de muntatge s'evapori.
(7) Estàndard de judici de brillantor de fluorescència: generalment es divideix en quatre nivells, és a dir, "un": no es pot veure fluorescència o no es pot veure una fluorescència feble. "plus": només es pot veure fluorescència clarament visible. "plus plus": visible i brillant
