Requisits per a la preparació de mostres rutinàries per microscòpia
El microscopi confocal és un nou producte d'alta tecnologia que fa època desenvolupat a la dècada de 1980 i és un dels instruments analítics importants en biologia molecular i ciències de la vida actual. La microscòpia confocal es basa en imatges de microscopi de fluorescència amb un dispositiu d'escaneig làser afegit, utilitzant un ordinador per al processament d'imatges per obtenir imatges fluorescents de la microestructura dins de cèl·lules o teixits, i per observar canvis en la morfologia de moltes màquines de senyal fisiològiques a nivell subcel·lular. Converteix-te en una potent eina de recerca en els camps de la morfologia, la biologia cel·lular molecular, la neurociència, la farmacologia, la genètica i altres camps científics.
La preparació de la mostra per a la microscòpia confocal és un pas crític abans de la detecció. Les mostres s'han d'etiquetar amb sondes fluorescents (simples, dobles, triples).
el
Els exemplars poden ser teixits fixos o vius, o cultius adherents fixos o vius. Les cèl·lules s'han de cultivar en petits plats de cultiu especials o cobertors Confocal. Suspengueu les cèl·lules, agiteu o deixeu caure llesques i cobreix-les amb una pel·lícula de coberta de cobertors. El gruix Zda de la mostra és d'uns 1 ~ 2 mm, el gruix del vidre de coberta utilitzat ha de ser inferior a 0,17 mm i el gruix del vidre lliscant ha d'estar entre 0,8~1,2 mm, i la superfície és llisa, el gruix és uniforme i no hi ha una fluorescència d'interferència evident. El medi de muntatge s'utilitza sovint per a mostres fixes i el glicerol preparat en PBS amb un pH de 8.5-9 s'utilitza habitualment per al muntatge.
Requisits rutinàries de preparació de mostres:
1. Selecció de colorants
Com que el microscopi confocal utilitza un làser d'una sola longitud d'ona com a font de llum, l'elecció dels colorants fluorescents s'ha de basar en la longitud d'ona del làser equipat amb el microscopi confocal. Si hi ha diversos colorants fluorescents a la mateixa mostra, la seva longitud d'ona d'emissió també s'ha de considerar tant com sigui possible. No superposeu-vos per evitar problemes de colors creuats.
2. Selecció del porta mostres
En general, la lent objectiu d'alta potència del microscopi confocal és una lent d'oli, la seva obertura numèrica és petita i la distància de treball entre la lent i la mostra no ha de ser superior a 0,17 mm. Les diapositives i els cobreobjectes estan bé. Si es tracta de cèl·lules en suspensió o partícules en suspensió, es pot utilitzar una placa de Petri dedicada a un microscopi confocal per portar la mostra per a l'observació.
3. Selecció del mitjà de muntatge
Si la mostra només s'ha d'observar una vegada i la fluorescència no s'apaga fàcilment, podeu triar una certa concentració de barreja de glicerol per segellar la diapositiva. Si la mostra s'ha de col·locar durant un període de temps i prendre diverses vegades, s'ha de seleccionar un mitjà de muntatge d'extinció anti-fluorescència per reduir la pèrdua de senyals fluorescents.
