Principis, característiques i ús de la microscòpia de fluorescència
El principi i les característiques estructurals d'un microscopi de fluorescència: un microscopi de fluorescència utilitza una font de llum puntual d'alta eficiència lluminosa, que emet una certa longitud d'ona de llum (com ara llum ultraviolada de 3650 polzades o llum blava ultraviolada de 4200 polzades) a través d'un sistema de filtrat de color com a llum d'excitació. La substància de fluorescència de la mostra s'excita per emetre diversos colors de fluorescència i després s'observa mitjançant l'ampliació de l'objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, fins i tot amb una fluorescència feble, és fàcilment reconeixible i altament sensible sota fons forts contrastats, utilitzat principalment per estudiar l'estructura i la funció cel·lular, així com la composició química. L'estructura bàsica d'un microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic normal i alguns accessoris (com ara una font de llum fluorescent, filtre d'excitació, separador de feix bicromàtic i filtre de bloqueig, etc.). Fonts de llum fluorescents: normalment utilitzen làmpades de mercuri d'alta pressió (50-200W), que poden emetre llum de diferents longituds d'ona. Tanmateix, cada substància fluorescent té una longitud d'ona de llum d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que cal afegir filtres d'excitació (generalment filtres d'excitació ultraviolats, morats, blaus i verds) per permetre que només una certa longitud d'ona de la llum d'excitació passi i s'il·lumini. l'exemplar, mentre absorbeix tota la resta de llum. Després de ser irradiada per llum excitada, cada substància emet fluorescència visible amb una longitud d'ona més gran que la irradiació en un període de temps molt curt. La fluorescència té especificitat i és generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar una fluorescència específica, cal afegir un filtre de bloqueig (o supressió) darrere de la lent de l'objectiu.
Té dues funcions: en primer lloc, absorbeix i bloqueja la llum d'excitació que entri a l'ocular per evitar pertorbar la fluorescència i danyar els ulls; en segon lloc, selecciona i permet que passi una fluorescència específica, mostrant un color de fluorescència específic. Els dos tipus de filtres s'han de seleccionar per utilitzar-los conjuntament.
