Principi i característiques estructurals del microscopi de fluorescència
El microscopi de fluorescència utilitza un punt d'alta eficiència lluminosa per emetre llum amb una certa longitud d'ona (com la llum ultraviolada 3650 o la llum blava violeta 4200) a través del sistema de filtre de color com a llum d'excitació i, a continuació, excita les substàncies fluorescents de la mostra per emetre'ls. fluorescència amb diferents colors, i després els observa mitjançant l'amplificació de la lent objectiu i l'ocular. D'aquesta manera, sota el fort contrast de fons, encara que la fluorescència sigui molt feble, és fàcil d'identificar i té una alta sensibilitat. S'utilitza principalment per a l'estudi de l'estructura i la funció cel·lular i la composició química. L'estructura bàsica del microscopi de fluorescència es compon d'un microscopi òptic ordinari i alguns accessoris (com ara font de llum fluorescent, filtre d'excitació, divisor de feix dicroic i filtre de bloqueig, etc.). Font de llum fluorescent —— En general s'utilitza una làmpada de mercuri d'ultra-alta pressió (50-200W), que pot emetre llum amb diverses longituds d'ona, però cada substància fluorescent té una longitud d'ona de llum d'excitació que produeix la fluorescència més forta, de manera que és cal afegir filtres d'excitació (generalment filtres d'excitació ultraviolats, morats, blaus i verds), de manera que només es transmeti una certa longitud d'ona de llum d'excitació a l'exemplar i s'absorbeixi tota la resta de llum. Després que cada substància sigui irradiada per llum d'excitació, emet una fluorescència visible més llarga que la longitud d'ona d'irradiació en molt poc temps. La fluorescència té especificitat, que és generalment més feble que la llum d'excitació. Per observar la fluorescència específica, cal bloquejar (o suprimir) darrere de la lent de l'objectiu i s'han d'utilitzar junts.
Diferència entre microscopi de fluorescència i microscopi comú
1. El mode d'il·luminació sol ser episòdic, és a dir, la font de llum es projecta sobre la mostra a través de la lent de l'objectiu;
2. La font de llum és llum ultraviolada amb longitud d'ona curta i resolució més alta que el microscopi normal;
3. Hi ha dos filtres especials, el de davant de la font de llum s'utilitza per filtrar la llum visible, i el que hi ha entre l'ocular i la lent de l'objectiu s'utilitza per filtrar la llum ultraviolada per protegir els ulls de la gent.
El microscopi de fluorescència també és una mena de microscopi òptic, la principal diferència és que les seves longituds d'ona d'excitació són diferents. Això determina la diferència entre el microscopi de fluorescència i el microscopi òptic ordinari en l'estructura i l'ús.
El microscopi de fluorescència és l'eina bàsica de la citoquímica d'immunofluorescència. Es compon de font de llum, sistema de placa de filtre i sistema òptic. Utilitza llum amb una certa longitud d'ona per excitar l'exemplar per emetre fluorescència, i l'amplia a través de la lent objectiu i el sistema d'oculars per observar la imatge de fluorescència de la mostra.
