Preparació i observació de mostres biològiques per a microscopis electrònics
La resolució d'un microscopi depèn de la longitud d'ona de la llum utilitzada. El microscopi electrònic, que va sorgir el 1933, va aconseguir una resolució significativament més alta que un microscopi òptic a causa de l'ús de feixos d'electrons amb longituds d'ona molt més curtes que la llum visible com a fonts de llum. Les diferents fonts de llum també determinen una sèrie de diferències entre els microscopis electrònics i els microscopis òptics.
A partir de les diferències en els principis de la imatge del feix d'electrons i de les maneres en què actuen sobre les mostres, els microscopis electrònics moderns s'han desenvolupat en molts tipus. Actualment, els més utilitzats són els microscopis electrònics de transmissió i els microscopis electrònics d'escaneig. El primer té un augment total que pot variar entre 1000-10000000 vegades, mentre que el segon té un augment total que pot variar entre 20-300000 vegades. Aquest experiment introdueix principalment la preparació de dos tipus de mostres de microscopi, la microscòpia electrònica de transmissió i la microscòpia electrònica d'escaneig.
2, Equips
1. La soca Escherichia coli és inclinada.
2. Solució o reactiu: acetat de pentil, àcid sulfúric concentrat, etanol anhidre, aigua estèril, solució aquosa al 2% de fosfotungstat de sodi (pH 6,5-8,0), solució de polivinil formaldehid (dissolt en cloroform), citocrom c, amoni pBR322.
3. Els instruments o altres eines inclouen microscopis òptics ordinaris, xarxes de coure, embuts de porcellana, vas de precipitats, plaques de Petri, comptagotes estèrils, pinces estèrils, agulles, portaobjectes de vidre, plaques de recompte, màquines de recobriment al buit, assecadors de punts crítics, etc.
3, passos d'operació
(1) Preparació i observació de mostres per a microscòpia electrònica de transmissió
1. Tractament de malla metàl·lica
La mostra d'un microscopi òptic es col·loca sobre un portaobjectes de vidre per a l'observació. Tanmateix, en un mirall de transmissió, com que els electrons no poden penetrar a la làmina de vidre, un material de malla només es pot utilitzar com a portador, comunament conegut com a malla portadora. La malla portadora es pot dividir en diverses especificacions a causa de diferents materials i formes, entre les quals s'utilitza habitualment la malla de coure amb 200-400 malles (nombre de forats). La malla de coure s'ha de tractar abans d'utilitzar-la per eliminar qualsevol brutícia i mantenir-la neta, en cas contrari afectarà la qualitat de la pel·lícula de suport i la claredat de les fotos de la mostra. La malla de coure de 400 malles utilitzada en aquest experiment es pot tractar pel mètode següent: primer, remullar i flotar amb acetat de pentil durant unes hores, després esbandir diverses vegades amb aigua destil·lada i, finalment, submergir i flotar la malla de coure en etanol anhidre per a la deshidratació. Si la malla de coure encara no està neta després dels mètodes anteriors, es pot remullar en àcid sulfúric concentrat diluït (1:1) durant 1-2 minuts, o bullir en una solució de NaOH a l'1% durant uns minuts, esbandida diverses vegades amb aigua destil·lada i després deshidratar-la en etanol anhidre per a un ús posterior.
