PH metre - Determinació i ajust del pH mitjà
Tots els microorganismes es veuen afectats pel pH de l'entorn on viuen. Sovint, la presència d'espècies selectives redueix el rang de pH en què creixen. De vegades, l'acidesa o l'alcalinitat del medi també pot actuar com a factor de selecció del creixement. Per als medis de prova bioquímics, però, el rang de pH en què els microorganismes presenten activitat tk al substrat és més estret que el rang de pH necessari per al creixement: per tant, és important ajustar el pH del medi al rang esperat. Quan el laboratori prepara el medi segons la composició del medi, s'ha de comprovar i ajustar el pH. Cal assenyalar que fins i tot per al medi deshidratat sintètic preparat que proporciona el fabricant (especialment per a alguns medis deshidratats d'estoc), el pH final s'ha de mesurar després de fer el medi experimental.
La manera més precisa de mesurar el pH d'un medi és amb un pH-metre. Abans d'utilitzar-lo, s'ha de calibrar amb una solució tampó estàndard de pH conegut (normalment el pH és de 4 a 7). Esbandiu l'elèctrode del medidor de pH amb aigua destil·lada i submergiu-lo en el medi de cultiu del vas de precipitats, i després llegiu el pH del medi de cultiu a l'escala del pHmetre. Cada fabricant proporciona instruccions de funcionament detallades per a cada tipus de mesurador de pH.
Quan es prepara el medi de cultiu, el PH es pot ajustar fàcilment mitjançant un mesurador de pH amb agitació mecànica. El medi de cultiu s'ha de preparar en un recipient (com un vas de precipitats gran) que es pugui remenar contínuament. o imants embolcallats amb tefló. El pH del medi que conté agar s'ha d'ajustar després de la descongelació, que es fa fàcilment amb un agitador magnètic escalfable. Quan ajusteu el pH, utilitzeu una solució tampó estàndard de pH conegut per calibrar primer el pH-metre. A continuació, poseu l'elèctrode compost i el termòmetre de resistència (si n'hi ha) al medi, afegiu lentament la quantitat adequada d'àcid clorhídric i hidròxid de sodi des de l'extrem del vas de precipitats lluny de l'elèctrode, de manera que el medi pugui assolir i mantenir el pH requerit.
La compensació de temperatura del pH-metre ha de tenir en compte l'efecte de la temperatura sobre el sistema d'elèctrodes: en algunes dilucions i medis, el pH canvia considerablement amb la temperatura. Per a medis líquids i dilucions, el pH es pot ajustar i mesurar a 25 graus o a la temperatura a la qual s'utilitzen.
El pH del medi d'agar s'ha d'ajustar després de la dissolució i la temperatura de dissolució és superior a 45 graus: per tant, el pH del medi sòlid s'ha de determinar a la seva temperatura d'ús. En aquest moment, s'ha d'utilitzar un elèctrode compost de capçal pla i la compensació de temperatura del mesurador de pH s'ha de calibrar manualment. En preparar el medi de cultiu, si es determina que el pH del medi de cultiu és diferent entre l'estat de fusió i l'estat de solidificació, vol dir que hi ha un error en l'ajust del pH.
De la mateixa manera, quan el medi preparat s'esterilitza per calor (p. ex., autoclau), també pot patir canvis de pH. Per al medi deshidratat, el fabricant ho ha tingut en compte, i normalment no cal ajustar el pH, però s'ha de comprovar acuradament el pH del medi que s'ha d'utilitzar. Si el pH del medi d'agar deshidratat s'ha d'ajustar durant la redissolució o la preparació, el millor és ajustar-lo amb una solució d'àcid clorhídric esterilitzat per filtre i hidròxid de sodi després de l'etapa d'esterilització per evitar la formació de sobreescalfament del medi. Quan es preparen medis amb diferents matèries primeres o productes farmacèutics, s'ha de comprovar el pH del medi després de l'autoclau. A més, si es troba que el pH del medi canvia igual després de cada autoclau, el pH es pot ajustar adequadament en preparar el medi. No obstant això, encara és necessari determinar el pH final del medi després de l'esterilització.
