Notes i consells sobre l'ús de diversos microscopis de contrast de fase
1) Instal·leu el dispositiu de contrast de fase: traieu la lent del condensador del microscopi normal i instal·leu la lent del condensador amb un diafragma anular en un microscopi coincident; traieu la lent objectiu normal del microscopi i substituïu-la per una lent objectiu amb una placa de fase; substituïu l'ocular per oculars d'enfocament per a microscopis de contrast de fase; filtres verds especials (de vegades no necessaris) es col·loquen a l'entrada de llum de la font de llum.
2) Alineació i enfocament de la llum: ajusteu l'ocular d'enfocament i el cargol d'ajust de gruix fins que es pugui veure clarament un cercle blanc i un cercle negre al camp de visió. El cercle negre està fixat i el cercle blanc es pot moure ajustant el cargol del dispositiu del condensador, de manera que el cercle negre i el cercle blanc coincideixen completament. Traieu l'ocular d'enfocament i substituïu-lo per l'ocular original del microscopi per comprovar-ho.
Anàlisi de problemes en l'ús del microscopi de contrast de fase
1. La influència del gruix de la mostra Quan es realitza l'observació de contrast de fase, el gruix de la mostra ha de ser de 5 μm o més prim. Quan s'utilitza una mostra més gruixuda, la capa superior de la mostra és molt clara, però la capa profunda es veurà borrosa i provocarà interferències de canvi de fase. i dispersió de la llum.
2. La influència del vidre de coberta i el vidre de llisca La mostra s'ha de cobrir amb un vidre de coberta, en cas contrari, l'anell brillant del diafragma anular i l'anell fosc de la placa de fase són difícils de superposar. L'observació del contrast de fase també té requisits elevats sobre la qualitat del vidre del vidre de llisca i del vidre de coberta. Quan hi ha rascades, gruix desigual o desnivell, es produirà una distorsió de l'anell brillant i una interferència de fase. A més, quan la diapositiva és massa gruixuda o massa prima, l'anell brillant del diafragma anular es farà més gran o més petit.
3. Efecte halo i esvaïment En el procés d'imatge del microscopi de contrast de fase, quan una estructura es torna fosca a causa del retard de fase, no és la pèrdua de llum, sinó el resultat de la redistribució de la llum en el pla de la imatge. Així, la llum que aparentment es perd a les zones fosques apareixerà com un halo brillant al voltant dels objectes més foscos. Aquest és un desavantatge de la microscòpia de contrast de fase, que dificulta l'observació d'estructures fines, i el fenomen d'halo és més greu quan el diafragma anular és molt estret. Un altre fenomen en la microscòpia de contrast de fase és l'efecte d'ombrejat, que es refereix a la pèrdua de contrast a les vores d'una àrea més gran amb el mateix retard de fase quan s'observa per contrast de fase.
4. Inversió de fase Quan n'n, el contrast clar i fosc de la imatge és just oposat, que s'anomena inversió de fase. És irreconeixible quan la diferència de fase δ=0, i el contrast es fa més gran amb l'augment de δ, i la inversió de fase apareixerà quan δ continua augmentant fins a un cert valor. Quan s'utilitza una lent d'objectiu d'alt valor d'absorbància del 90 per cent (alt contrast), aquest valor de transformació és d'aproximadament 0,55λ, i quan s'utilitza una lent d'objectiu d'absorbància estàndard del 70 per cent, és d'aproximadament 0,33λ. . S'han d'utilitzar objectius amb valors d'absorbància més alts per resoldre diferències de camins òptics més petites.
