Aula d'imatge microscòpica丨Microscopi de fluorescència de camp ample
En aplicacions d'imatge de cèl·lules vives, la microscòpia de fluorescència de camp ampli facilita l'observació de la dinàmica de les cèl·lules adherents cultivades en cambres ambientals específiques col·locades a l'escenari del microscopi. En la seva configuració més bàsica, un microscopi de cultiu de teixits invertit estàndard equipat amb il·luminació de fluorescència EPI s'acobla amb un sistema detector de matriu d'àrea (generalment una càmera CCD), filtres de fluorescència adequats i un sistema d'obturador per limitar l'exposició excessiva de les cèl·lules a la llum d'excitació nociva. . La microscòpia de fluorescència bàsica es basa en filtres d'interferència acuradament ajustats per seleccionar amplades de banda específiques per a la il·luminació i la detecció de la llum emesa. Les fonts de llum inclouen llums d'arc de mercuri, xenó i halogenurs metàl·lics, sistemes làser d'expansió de feix i díodes emissors de llum (LED), tots els quals requereixen especificacions de filtre diferents. Els fluoròfors sintètics utilitzats en la microscòpia de fluorescència tenen espectres d'emissió que cobreixen les regions properes a l'ultraviolada, visible i infraroig proper. L'ús de proteïnes fluorescents codificades genèticament ha ampliat molt les capacitats de la microscòpia de fluorescència en la imatge de cèl·lules vives, permetent als investigadors orientar-se amb precisió a les regions subcel·lulars d'interès.
Nuohai LS 18, un nou tipus de microscopi d'il·luminació de fulls de llum desenvolupat de manera independent per Nuohai, està especialment dissenyat per a imatges en 3D d'alta resolució de mostres de teixit grans transparents i es dedica a explorar diversos teixits intactes com el cervell, la melsa i l'intestí prim. , ronyó, pulmó, cor i tumor. Estructura precisa dels òrgans en 3D.
En fluorescència de camp ampli, l'emissió d'obertura completa recollida per l'objectiu del microscopi maximitza el senyal gravat alhora que minimitza el temps d'exposició necessari. Així, les mostres es poden capturar amb períodes de llum molt curts. El principal desavantatge de la imatge de camp ampli és que la fluorescència de regions allunyades del pla focal, així com el senyal de fons, és una llum no desitjada que sovint enfosquia les característiques d'interès. Per tant, la imatge de camp ampli ofereix els millors resultats quan les característiques d'interès són grans (com els orgànuls) o de naturalesa molt puntual. Una gran varietat de mostres de cèl·lules vives, incloses cèl·lules adherents, bacteris, llevats i seccions de teixit molt primes, són candidats ideals per a imatges de fluorescència de camp ampli, però, els teixits més gruixuts (més de 5 micres) s'utilitzen millor amb mètodes d'imatge més avançats.
Tot i que hi ha hagut molts avenços en la imatge fluorescent amb colorants fluorescents sintètics, punts quàntics i proteïnes fluorescents, en alguns casos és útil combinar la fluorescència amb altres modalitats d'imatge. Com a exemple, el DIC es pot utilitzar juntament amb la fluorescència de camp ampli per controlar la viabilitat cel·lular i la morfologia general mentre s'estudien fenòmens d'interès per a objectius marcats específics. Adquirir DIC i fluorescència en una sola imatge sol ser poc pràctic, però en un microscopi configurat correctament les dues tècniques es poden utilitzar seqüencialment. Així, després de la imatge en mode d'epifluorescència, es poden adquirir imatges DIC a partir de mostres marcades amb fluorescència mitjançant llum transmesa. Les dues imatges es poden fusionar durant la postanàlisi. L'adquisició simultània d'imatges DIC i de fluorescència és possible en configuracions avançades de microscopi de camp ampli mitjançant il·luminació separada espectralment (com ara visible i infraroig proper) i adaptadors de càmera dual o de vista dividida. A la majoria de microscopis confocals d'escaneig làser, les imatges es poden adquirir tant en modes de fluorescència com de DIC simultàniament, eliminant la necessitat de processament posterior a l'adquisició. El contrast de fase i el contrast de modulació Hoffman també es poden utilitzar juntament amb la microscòpia de fluorescència de camp ampli. Tanmateix, en aquestes tècniques, la lent de l'objectiu és especial, tant si es tracta d'un anell de fases com d'una placa de modulació Hoffman, provocarà una pèrdua d'intensitat d'emissió del 5-15 per cent.
Enllaç a l'article: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
