Introducció als avantatges i desavantatges de la microscòpia d'escaneig làser multifotòn
1. Utilitzant llum vermella o llum infraroja per excitar, la dispersió de la llum és petita i la dispersió de partícules petites és inversament proporcional a la quarta potència de la longitud d'ona.
2. Es poden recollir més fotons dispersos de la secció transversal de la imatge sense necessitat de forats.
3. El forat no pot distingir els fotons dispersos emesos des de l'àrea desenfocada o de l'àrea d'enfocament, i la relació senyal-soroll de la imatge multifotònica en capes profundes és bona.
4. La llum ultraviolada o visible utilitzada per a l'excitació d'un sol fotó és fàcilment absorbida i atenuada per la mostra abans que el feix arribi al pla focal, i és difícil excitar capes profundes.
5. Pel que fa a l'observació al microscopi biològic, la primera consideració és no danyar l'estat actiu del propi organisme i mantenir el flux d'aigua, la concentració d'ions, l'oxigen i els nutrients. En el cas de l'observació de la llum, tant la calor com l'energia fotogràfica s'han de mantenir dins de la quantitat d'irradiació i l'energia lluminosa perquè les cèl·lules no es facin malbé.
6. La microscòpia multifotònica té molts avantatges. Com ara la resolució tridimensional, la penetració en profunditat, l'eficiència de dispersió, la llum de fons, la relació senyal-soroll, el control, etc., tots tenen característiques que els microscopis làser anteriors no tenien o no es podien comparar.
Desavantatges de la microscòpia d'escaneig làser multifotòn:
1. Només pot imatge fluorescència.
2. Si la mostra conté cromòfors que absorbeixen la llum d'excitació, la mostra pot estar danyada tèrmicament.
3. La resolució es redueix lleugerament. Encara que es pot millorar utilitzant forats confocals al mateix temps, hi ha pèrdua de senyal.
4. Limitat pels làsers ultraràpids cars, el cost dels microscopis d'exploració multifotòn és relativament elevat.
