Avantatges millorats de la microscòpia multifotònica d'escaneig làser
La microscòpia multifotònica d'escaneig làser és una millora important de la microscòpia òptica, principalment per observar l'estructura profunda de cèl·lules vives, cèl·lules fixes i teixits, i pot obtenir estructures de pla Z multicapa clares i nítides, és a dir, rodanxes òptiques, i pot construir L'estructura sòlida tridimensional de la mostra. El microscopi confocal utilitza una font de llum làser, que s'amplia per omplir tot el pla focal posterior de la lent de l'objectiu, i després convergeix en un punt molt petit en el pla focal de la mostra a través del sistema de lents de la lent de l'objectiu. Depenent de l'obertura numèrica de la lent de l'objectiu, el diàmetre del punt d'il·luminació més brillant és d'aproximadament 0,25 ~ 0,8 μm, i la profunditat és d'aproximadament 0,5 ~ 1,5 μm. La mida del punt confocal depèn del disseny del microscopi, la longitud d'ona del làser, les característiques de la lent de l'objectiu, la configuració de l'estat de la unitat d'escaneig i la naturalesa de la mostra. Els microscopis de camp tenen un gran rang d'il·luminació i una gran profunditat d'il·luminació, mentre que els microscopis confocals tenen una il·luminació que es concentra en un punt focal del pla focal. L'avantatge més bàsic de la microscòpia confocal és que pot realitzar una secció òptica fina de mostres fluorescents gruixudes (fins a 50 μm o més), amb un gruix d'uns 0,5 a 1,5 μm. Es poden obtenir una sèrie d'imatges de secció òptica movent la mostra cap amunt i cap avall amb el motor pas a pas de l'eix Z del microscopi. L'adquisició d'informació d'imatge es controla dins del pla i no serà interferida per senyals d'altres ubicacions de l'espècimen. Després d'eliminar l'efecte de la fluorescència de fons i augmentar la relació senyal-soroll, el contrast i la resolució de les imatges confocals es milloren significativament en comparació amb les imatges de fluorescència d'il·luminació de camp tradicionals. En molts exemplars, molts components estructurals complexos s'entrellacen per formar sistemes complexos, però un cop es poden recollir prou seccions òptiques, podem reconstruir-les en 3D mitjançant programari. Aquest enfocament experimental s'ha utilitzat àmpliament en la investigació biològica per dilucidar les complexes relacions estructurals i funcionals entre cèl·lules o teixits.
