Com triar el microscopi de fluorescència adequat
El microscopi de fluorescència és un equip d'imatge microscòpica estàndard per a laboratoris i departaments de patologia. Utilitza característiques de fluorescència per a l'observació i la imatge. S'utilitza àmpliament en biologia cel·lular, neurobiologia, botànica, microbiologia, patologia, genètica i altres camps. La imatge de fluorescència té els avantatges d'una alta sensibilitat i alta especificitat, i és molt adequada per a l'observació de la distribució de proteïnes i orgànuls específics en teixits i cèl·lules, l'estudi de la colocalització i la interacció, el seguiment de processos dinàmics de la vida com els canvis de concentració d'ions. , etc.
Elecció del microscopi
Els microscopis de fluorescència es divideixen principalment en tres categories: microscopis de fluorescència verticals (aptes per seccionar), microscopis de fluorescència invertida (adequats per a cèl·lules vives, tenint en compte la secció), microscopis de fluorescència estereoscòpics (adequats per a exemplars més grans, com ara plantes, peixos zebra (adults/ embrió), medaka, òrgans de ratolí/rata, etc.).
Selecció de cubs de filtre de fluorescència
A més de tenir en compte les longituds d'ona d'excitació i emissió de les sondes fluorescents, la selecció de blocs de filtre també ha de considerar si hi ha excitació no específica i color creuat per a mostres marcades amb diversos colors. En l'experiment, intentarem triar la longitud d'ona més propera al pic d'excitació per a l'excitació, i el rang de recepció ha d'incloure el pic d'emissió. Per exemple, el pic d'excitació de l'Alexa Fluor 488 és de 500 nm i es pot seleccionar un filtre d'excitació 480/40 en un microscopi de fluorescència. Els cubs de filtre de fluorescència que s'utilitzen habitualment als microscopis de fluorescència es poden dividir en dos tipus: passatge llarg (LP per a curt) i passatge de banda (BP per breu), que també s'han de seleccionar segons les necessitats.
Elecció de la font de llum fluorescent
Les fonts de llum fluorescents que s'utilitzen habitualment inclouen les làmpades de mercuri, les làmpades d'halogenur metàl·lic i les fonts de llum LED que s'han desenvolupat ràpidament en els darrers anys. L'espectre de la font de llum fluorescent és continu i discontinu, i l'energia serà diferent en diferents bandes. A causa de la seva banda espectral relativament estreta, una producció d'energia més estable, una llarga vida útil, seguretat i protecció del medi ambient i molts altres avantatges, la font de llum LED s'està convertint gradualment en la principal font de llum del microscopi de fluorescència.
microscopi confocal
En l'observació tradicional del microscopi de fluorescència, a causa de la superposició de substàncies marcadores fluorescents i estructures d'autofluorescència, es combinen estretament, mentre que la lent objectiu del microscopi epifluorescència tradicional no només recull la llum del pla focal, sinó que també recull la llum dispersa per sobre i per sota del pla focal, el que resulta en una resolució i contrast de la imatge molt reduïts.
La imatge confocal resol aquest problema només detectant la part de la llum reflectida des del pla focal. La font de llum passa per un forat per formar un punt de llum petit i fi al pla focal. La llum emesa des del pla focal és recollida per la lent de l'objectiu. La major part de la fluorescència emesa des del punt per sobre o per sota del pla focal de la lent de l'objectiu no pot convergir cap al petit forat. Només la fluorescència situada al pla focal i una petita part de la fluorescència fora de focus poden passar a través del forat, mentre que els raigs de llum fora del pla focal convergeixen a la part davantera o posterior de la placa del forat i es bloquegen per entrar al detector. el forat. La imatge detectada és la imatge del pla focal, de manera que la qualitat de la imatge final es millora molt.
A causa dels avantatges i la practicabilitat de les funcions del microscopi confocal d'escaneig làser, el microscopi confocal és un assistent experimental indispensable en el camp de la biologia cel·lular, la botànica i la investigació cel·lular d'alta precisió. Al mateix temps, en el futur centre de recerca científica, serà l'eina de recerca científica més bàsica i bàsica.
