Funcionament bàsic del microscopi de fluorescència
a. Apagueu els llums de l'habitació i enceneu la làmpada de mercuri del microscopi;
b. Seleccioneu el filtre corresponent segons la fluoresceïna marcada per la mostra;
c. Col·loqueu la mostra i trobeu un camp de visió adequat;
d. Si necessiteu fer fotos, confirmeu que la pel·lícula en color està instal·lada a la càmera;
e. Enceneu el dispositiu Selfie, seleccioneu l'engranatge manual, normalment la velocitat de tir és de 0.5-10 segons;
f. Després de l'ús, apagueu tota l'alimentació i feu un registre de l'ús. el
el
3. Mètode d'enregistrament de la imatge de fluorescència
La imatge de fluorescència vista pel microscopi de fluorescència té característiques morfològiques i color i brillantor de fluorescència. A l'hora de jutjar els resultats, els dos s'han de combinar per a un judici global. Els resultats es registren a partir d'indicadors subjectius, és a dir, l'observació visual dels treballadors. Com a observació qualitativa general, bàsicament fiable. Amb el desenvolupament de la tecnologia i la ciència, s'utilitzen indicadors objectius per registrar els resultats del judici en diferents graus, com ara espectrofotòmetres cel·lulars, analitzadors d'imatges i altres instruments. Tanmateix, els resultats registrats per aquests instruments també s'han de combinar amb judicis subjectius. el
La fotografia amb microscopi de fluorescència és molt necessària per enregistrar imatges de fluorescència. Com que la fluorescència és fàcil d'esvair i debilitar, és necessari registrar els resultats en temps real. El mètode és bàsicament el mateix que el de la fotomicrografia ordinària. Només cal utilitzar pel·lícula fotosensible d'alta velocitat. Com que la llum ultraviolada té un fort efecte en l'extinció de la fluorescència, com ara els marcadors FITC, la brillantor de la fluorescència disminuirà un 50 per cent quan s'irradia amb llum ultraviolada durant 30 segons. Per tant, si la velocitat d'exposició és massa lenta, no es pot fer la imatge fluorescent. Els microscopis de fluorescència d'investigació general tenen dispositius de sistema de fotomicrografia semiautomàtics o totalment automàtics. el
el
4. Precaucions per utilitzar la microscòpia de fluorescència
a. Funcioneu estrictament d'acord amb els requisits de les instruccions de fàbrica del microscopi de fluorescència i no canvieu el programa a voluntat. el
b. La inspecció s'ha de dur a terme en una habitació fosca. Després d'entrar a la cambra fosca, connecteu la font d'alimentació i enceneu la làmpada de mercuri d'ultra alta pressió durant 5-15 minuts. Després que la llum forta de la font de llum sigui estable, els ulls s'adapten completament a la cambra fosca i comencen a observar l'exemplar. el
c. Per evitar el dany dels raigs ultraviolats als ulls, utilitzeu ulleres protectores quan ajusteu la font de llum. el
d. El temps d'inspecció és preferiblement de 1-2 hores cada vegada. Si supera els 90 minuts, la intensitat lluminosa de la làmpada de mercuri d'ultra alta pressió disminuirà gradualment i la fluorescència es debilitarà; després d'irradiar l'exemplar amb llum ultraviolada durant 3-5 minuts, la fluorescència també es debilitarà significativament; per tant, no hauria de superar les 2-3 hores com a màxim. . el
e. La vida útil de la font de llum del microscopi fluorescent és limitada i les mostres s'han de comprovar de manera centralitzada per estalviar temps i protegir la font de llum. Quan fa calor, s'han d'afegir ventiladors per dissipar la calor i les bombetes noves s'han d'enregistrar des del començament del seu temps d'ús. Quan la vulgueu tornar a utilitzar després d'apagar la làmpada, heu d'esperar fins que la bombeta es refredi prou abans d'encendre-la. Eviteu encendre la font de llum diverses vegades al dia. el
f. Observeu la mostra immediatament després de la tinció, ja que la fluorescència es debilitarà gradualment amb el temps. Si l'exemplar s'emmagatzema en una bossa de plàstic de polietilè a 4 graus, el temps de debilitament de la fluorescència es pot retardar i es pot evitar que l'agent de muntatge s'evapori. el
g. Estàndard de judici de la brillantor de la fluorescència: generalment es divideix en quatre nivells, és a dir, "-" significa que no es pot veure una fluorescència dèbil o no. "+" significa que només es va veure fluorescència clarament visible. "plus plus" significa que és visible una fluorescència brillant. "plus plus plus" significa fluorescència brillant visible.
