Millorar els avantatges de la microscòpia d'exploració làser multifotònica
La microscòpia multifotònica d'escaneig làser és una millora important respecte a la microscòpia òptica. Pot observar l'estructura profunda de cèl·lules vives, cèl·lules fixes i teixits, i pot obtenir estructures de pla Z multicapa clares i nítides, és a dir, seccions òptiques, a partir de les quals pot construir l'estructura sòlida tridimensional de l'exemplar. La microscòpia confocal utilitza una font de llum làser que, després de l'expansió, omple tot el pla focal posterior de la lent objectiu i després passa pel sistema de lents de la lent objectiu per convergir en un punt molt petit del pla focal de la mostra. Depenent de l'obertura numèrica de la lent de l'objectiu, el diàmetre del punt d'il·luminació més brillant és d'aproximadament 0.25 ~ 0.8μm i la profunditat és d'aproximadament 0.5 ~ 1.5μm . La mida del punt confocal depèn del disseny del microscopi, la longitud d'ona del làser, les característiques de la lent de l'objectiu, la configuració d'estat de la unitat d'escaneig i les propietats de la mostra. El rang d'il·luminació i la profunditat d'il·luminació d'un microscopi de camp són grans, mentre que la il·luminació d'un microscopi confocal es concentra en un enfocament precís al pla focal. L'avantatge més bàsic de la microscòpia confocal és que pot realitzar una secció òptica fina de mostres fluorescents gruixudes (que poden arribar a 50 μm o més) i el gruix de les rodanxes és d'entre 0,5 i 1,5 μm. Es poden obtenir imatges de secció òptica en sèrie movent la mostra cap amunt i cap avall mitjançant un sofisticat motor pas a pas d'eix Z de microscopi. La recopilació d'informació d'imatge es controla en un pla precís sense ser interferida per senyals emeses des d'altres ubicacions de la mostra. Després d'eliminar la influència de la fluorescència de fons i augmentar la relació senyal-soroll, el contrast i la resolució de les imatges confocals es milloren significativament en comparació amb les imatges de fluorescència il·luminades en camp tradicionals. En molts exemplars, molts components estructurals complexos s'entrellacen per formar sistemes complexos, però un cop es poden recollir prou seccions òptiques, podem reconstruir-les en tres dimensions mitjançant programari. Aquest mètode experimental s'ha utilitzat àmpliament en la investigació biològica per dilucidar les complexes relacions estructurals i funcionals entre cèl·lules o teixits.
