Diferència entre un microscopi de fluorescència i un microscopi normal
Recentment he intentat fer algunes seccions congelades de ratolins. A continuació, utilitzaré un microscopi de fluorescència per veure si el virus que vaig injectar es troba a la zona del cervell que vull. Alguns principis bàsics de la microscòpia de fluorescència s'han d'aprendre breument, i els compartiré aquí.
Els microscopis de fluorescència utilitzen llum ultraviolada com a font de llum per il·luminar l'objecte que s'inspecciona, fent que l'objecte emeti llum i, a continuació, observeu l'objecte al microscopi. S'utilitza principalment per a cèl·lules d'immunofluorescència. Es compon principalment d'una font de llum, un sistema de plaques de filtre i un sistema òptic. La imatge fluorescent de la mostra s'observa mitjançant l'ampliació de l'ocular i la lent de l'objectiu. Fem una ullada a la diferència entre un microscopi de fluorescència i un microscopi òptic normal.
1. Mira el mètode d'il·luminació
El mètode d'il·luminació del microscopi de fluorescència és generalment l'epi-il·luminació, el que significa que la font de llum es col·loca a la mostra de prova a través de la lent de l'objectiu.
2. Mira la resolució
Els microscopis de fluorescència utilitzen la llum ultraviolada com a font de llum, que té una longitud d'ona més curta però una resolució més alta que els microscopis òptics ordinaris.
3. Diferències en els filtres
Els microscopis de fluorescència utilitzen dos filtres especials, un que s'utilitza davant de la font de llum per filtrar la llum visible i un altre que s'utilitza entre la lent de l'objectiu i l'ocular per filtrar els raigs ultraviolats, que poden protegir els ulls humans.
El microscopi de fluorescència també és un tipus de microscopi òptic. La raó principal és que la longitud d'ona excitada pel microscopi de fluorescència és curta, de manera que això condueix a la diferència d'estructura i ús entre el microscopi de fluorescència i el microscopi normal. La majoria dels microscopis de fluorescència tenen una bona funció de captar llum feble. , de manera que la seva capacitat d'imatge també és bona amb una fluorescència extremadament feble. Juntament amb la millora contínua dels microscopis de fluorescència en els darrers anys, el soroll també s'ha reduït molt. Per tant, cada cop s'utilitzen més microscopis de fluorescència.
Coneixements sobre microscòpia de fluorescència de dos fotons
El principi bàsic de l'excitació de dos fotons és: sota la condició d'alta densitat de fotons, les molècules fluorescents poden absorbir dos fotons de longitud d'ona llarga al mateix temps i, després d'una curta vida de l'anomenat estat excitat, emetre un fotó amb una longitud d'ona més curta. . ;L'efecte és el mateix que utilitzar un fotó amb una longitud d'ona la meitat de la longitud d'ona llarga per excitar molècules fluorescents. L'excitació de dos fotons requereix una alta densitat de fotons. Per no danyar les cèl·lules, els microscopis de dos fotons utilitzen làsers de pols bloquejats en mode d'alta energia. Aquest làser emet llum làser amb una energia màxima alta i una energia mitjana baixa, amb una amplada de pols de només 100 femtosegons i una freqüència de 80 a 100 MHz. Quan s'utilitza una lent objectiu d'obertura numèrica alta per enfocar els fotons del làser polsat, la densitat de fotons al focus de la lent de l'objectiu és la més alta. L'excitació de dos fotons només es produeix al focus de la lent de l'objectiu, de manera que el microscopi de dos fotons no requereix un forat confocal, cosa que millora l'eficiència de detecció de fluorescència.
En el fenomen de fluorescència general, a causa de la baixa densitat de fotons de la llum d'excitació, una molècula fluorescent només pot absorbir un fotó al mateix temps i després emetre un fotó de fluorescència mitjançant una transició radiativa. Aquesta és la fluorescència d'un sol fotó. Per al procés d'excitació de fluorescència utilitzant làser com a font de llum, es poden produir fenòmens de fluorescència de dos fotons o fins i tot de múltiples fotons. En aquest cas, la intensitat de la font de llum d'excitació utilitzada és alta i la densitat de fotons compleix el requisit perquè les molècules fluorescents absorbeixin dos fotons alhora. En el procés d'utilitzar làsers ordinaris com a fonts de llum d'excitació, la densitat de fotons encara no és suficient per produir una absorció de dos fotons. Normalment s'utilitzen làsers de pols de femtosegons i la seva potència instantània pot arribar al nivell de megawatts. Per tant, la longitud d'ona de la fluorescència de dos fotons és més curta que la longitud d'ona de la llum d'excitació, que és equivalent a l'efecte produït per l'excitació de la longitud d'ona de mitja excitació.
