Determinació del nombre de microorganismes-Mètode de recompte directe microscòpic!
El creixement de la població bacteriana es manifesta per un augment del nombre de cèl·lules o un augment del material cel·lular. Els mètodes per determinar el nombre de cèl·lules inclouen el recompte microscòpic directe, el recompte de plaques, l'estimació de la terbolesa per espectrofotòmetre, el nombre més probable MPN i la filtració de membrana. (filtració de membrana), etc. Els mètodes per mesurar les substàncies cel·lulars inclouen la determinació del pes sec cel·lular, la determinació de determinats components cel·lulars, com ara el contingut de nitrogen, el contingut d'ARN i ADN, i la determinació de productes metabòlits. En resum, hi ha molts mètodes per mesurar el creixement microbià, cadascun amb els seus avantatges i desavantatges. El mètode s'ha de seleccionar segons els requisits específics del treball. Aquest experiment introdueix principalment el mètode de recompte directe al microscopi que s'utilitza habitualment en el treball de producció i investigació científica.
1. Requisits de finalitat
1. Aclareix el principi del recompte amb un tauler de recompte de cèl·lules sanguínies.
2. Dominar el mètode de recompte de microorganismes mitjançant un tauler de recompte de cèl·lules sanguínies.
2. Principis bàsics
El mètode de recompte directe al microscopi és un mètode senzill, ràpid i intuïtiu que posa una petita quantitat de suspensió de la mostra a provar en un portaobjectes especial amb una àrea i un volum determinats (també anomenat bacteriòmetre) i la compta directament sota un microscopi. Mètodes. Actualment, els bacteriòmetres d'ús habitual a casa i a l'estranger inclouen: hemocitòmetre, bacteriòmetre Peteroff-Hauser i bacteriòmetre Hawksley, etc. Tots es poden utilitzar per comptar llevats, bacteris, espores de floridura i altres suspensions, i els principis bàsics són els mateixos. Els dos últims comptadors de bacteris tenen un volum total de 0.02 mm3 després de ser coberts amb un vidre de coberta, i la distància entre el vidre de la coberta i la diapositiva és de només 0,02 mm. Per tant, es pot utilitzar una lent d'objectiu d'immersió en oli per observar i detectar cèl·lules més petites com els bacteris. comptar. A més d'utilitzar aquests bacteriòmetres, també hi ha un mètode d'estimació que observa directament la relació entre l'àrea de frotis i l'àrea del camp visual sota un microscopi. Aquest mètode s'utilitza generalment per a l'examen bacteriològic de la llet. Els avantatges del mètode de recompte directe al microscopi són que és intuïtiu, ràpid i fàcil d'utilitzar. Tanmateix, el desavantatge d'aquest mètode és que el resultat mesurat sol ser la suma de bacteris morts i bacteris vius. Actualment hi ha alguns mètodes per superar aquesta mancança, com ara combinar el cultiu de microcambra de tinció de bacteris viables (poc temps) i afegir inhibidors de la divisió cel·lular per aconseguir el propòsit de comptar només bacteris viables.
Aquest experiment utilitza un hemocitòmetre com a exemple per fer un recompte directe sota un microscopi. Per a l'ús dels altres dos bacteriòmetres, consulteu les instruccions de cada fabricant. El recompte directe sota un microscopi mitjançant un hemocitòmetre és un mètode d'enumeració microbiana d'ús habitual. El tauler de recompte és un tobogan especial amb quatre solcs que formen tres plataformes; la plataforma més ampla al mig es divideix en dues meitats per una ranura horitzontal curta i hi ha una quadrícula a cada costat de la plataforma. Cada graella quadrada es divideix en nou quadrats grans, i el quadrat gran del mig és la sala de recompte. L'estructura del tauler de recompte de cèl·lules sanguínies es mostra a la figura {{0}}. En general, hi ha dues especificacions per a l'escala de la cambra de recompte. Un és un quadrat gran dividit en 25 quadrats mitjans, i cada quadrat mitjà està dividit en 16 quadrats petits (figura 15-2); l'altre és un gran quadrat. La graella quadrada es divideix en 16 quadrats mitjans i cada quadrat mitjà es divideix en 25 quadrats petits. Tanmateix, independentment del tipus de tauler de recompte que sigui, hi ha 400 quadrats petits a cada quadrat gran. La longitud lateral de cada quadrat gran és lmm, llavors l'àrea de cada quadrat gran és lmm2. Després de cobrir el cobertor, l'alçada entre el cobertor i el portaobjectes és de 0,lmm, de manera que el volum de la cambra de recompte és de 0,lmm3 (una desena mil·lèsima part de mil·lilitre). Figura 15-1 Estructura del tauler de recompte de cèl·lules sanguínies (1) Figura 15-2 Estructura del tauler de recompte de cèl·lules sanguínies (2) A. Vista frontal; B. Secció longitudinal; quadrícula quadrada ampliada, el quadrat gran del mig és la cambra de recompte 1. Tauler de recompte de cèl·lules sanguínies; 2. Portaobjectes; 3. Quan es compta a la cambra de recompte, normalment es compta el nombre total de bacteris en cinc quadrats, després es troba el valor mitjà de cada quadrat i després es multiplica per 25 o 16 per obtenir El nombre total de bacteris en un quadrat gran es converteix després al nombre total de bacteris en 1 ml de solució bacteriana. Suposem que el nombre total de bacteris als cinc quadrats mitjans és A i el factor de dilució de la solució bacteriana és B. Si es tracta d'una placa de recompte amb 25 quadrats mitjans, aleshores el nombre total de bacteris en 1 ml de la solució bacteriana {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (peces) De la mateixa manera, si es tracta d'una placa de recompte amb 16 quadrats, el nombre total de bacteris en 1 ml de solució bacteriana {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (peces),,
